[发明专利]一种针对循环肿瘤细胞的lncRNA和AR3联合检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，是一种针对循环肿瘤细胞的lncRNA和AR3联合检测试剂盒及用于诊断AR相关肿瘤的去势抵抗及复发。

背景技术

癌症占人类死亡病因的近1/4。在过去的几十年里肿瘤复发和转移仍是改善整体存活率的主要障碍，这可能主要归因于人们对于癌症生物学仍然缺乏全面的了解。例如，功能基因组学研究的最新进展表明，参与人类基因转录的绝大多数是非编码RNA。然而，对于lncRNAs在调控癌症基因表达及机制等方面人类仍然所知甚少[1]。

近期我们通过对肿瘤表观遗传机制的研究发现lncRNAs可以通过多种机制调控肿瘤的进展。新近有研究表明lncRNA PCGEM1可以与雄激素受体AR结合作用[2]。PCGEM1在前列腺癌上调[3]，可 促进细胞增殖[4]，而我们则通过临床标本研究发现，PCGEM1的基因表达与前列腺癌恶性程度及转移复发呈高度相关性，PCGEM1不但可以通过与AR直接作用，更重要的是PCGEM1与AR异构体(如AR3)的表达呈高度正相关，我们进一步证明了PCGEM1通过选择性转录修饰调控了AR的异构体如AR3的表达。由此发现lncRNAs如PCGEM1可能通过调控AR基因转录的表观遗传机制参与AR相关肿瘤的增殖、恶性侵袭复发及转移驱动。因为在一定程度上是由于AR的异构体如AR-V7(AR3)介导了该类肿瘤的激素去势抵抗，而并非野生型全长AR。而研究已表明AR-V7在很大程度上诱导形成了相关肿瘤如前列腺癌的激素去势抵抗[5]。

针对上述AR相关肿瘤的特异性调节lncRNAs如PCGEM1和该类肿瘤的激素去势抵抗的高度相关AR异构体(如AR3)的表达呈高度相关性，通过荧光原位杂交及免疫组织化学技术联合检测临床组织标本的上述指标，可以高度有效的评估和预测诊断AR相关肿瘤的激素去势抵抗和复发转移，并在激素去势抵抗和复发转移的早期做出诊断。该项申请的技术及试剂盒是基于当前最新的研究结果而建立。这是一种目前其他方法都无法替代的检测方法，迄今为止尚未见相关报道。

一方面，循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)，即从实体肿瘤中脱落并进入血液循环，形成随血液循环的肿瘤细胞。这些细胞被认为和肿瘤的远端转移等问题有重大关系，目前较成熟的检测技术多采用免疫标记方法进行分离检测分析，目前已经有成熟的技术手段用于循环肿瘤细胞的分离和鉴定，如美国强生公司旗下Veridex公司研发的CellSearch系统，该系统具有很好的特异性、灵敏度、准确性和可重复性，是目前唯一获得FDA、SFDA认证的技术，在美国已经被广泛应用到临床诊断。

另一方面，直观快捷地检测基因；此外，能够高效、准确的检测该特异性目标检测基因，并放大该信号，较常规的染色检测更为灵敏和精确。本发明是基于最新的长链非编码RNA(lncRNA)参与的肿瘤表观遗传调控机制。最重要的是联合检测PCGEM1及雄激素受体异构体AR-V7(AR3)，是建立在lncRNAs PCGEM1通过本发明证明的表观遗传调控机制的基础上。即lncRNA PCGEM1通过调控AR-V7(AR3)pre-mRNA的转录后修饰及共定位，直接决定了表达雄激素受体的肿瘤如前列腺癌、肺癌及乳腺癌等的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移。尤其本发明基于研究所发现的lncRNA PCGEM1通过调控pre-mRNA剪切的转录后修饰控制雄激素受体(AR)异构体(AR-V7(AR3))的产生的新理论。该lncRNA PCGEM1--AR-V7(AR3)调节机制的新理论所介导的雄激素受体(AR)的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移。联合检测循环肿瘤细胞的PCGEM1及雄激素受体异构体AR-V7(AR3)的表达可以有效的预测和评价雄激素受体(AR)的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移情况。

参考文献：1.Xie C,Yuan J,Li H,Li M,Zhao G,Bu D,et al.NONCODEv4:exploring the world of long non-coding RNA genes.Nucleic acids research.2013；doi:10.1093/nar/gkt1222.

2.Yang L,Lin C,Jin C,Yang JC,Tanasa B,Li W,et al.lncRNA-dependent mechanisms of androgen-receptor-regulated gene activation programs.Nature.2013；29:598-602.