[发明专利]卡贝缩宫素的合成工艺

说明书

技术领域

本发明涉及多肽药物化学合成领域，具体涉及一种卡贝缩宫素的合成工艺。

背景技术

卡贝缩宫素（Carbetocin）是一种化学合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素为长。卡贝缩宫素还有很好的安全性，在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰，因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。

卡贝缩宫素化学名称：[丁酰-L-（4-甲基）酪氨酰-L-异亮氨酰-L-谷胺酰-L-天冬胺酰-L-半胱氨酰]-L-脯氨酰-L-亮氨酰-甘氨酰胺（丁酸与半胱氨酸形成硫醚键）

化学结构式：[Butyry-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys]-Pro-Leu-Gly-NH₂，分子式：C45H69N11O12S，分子量：988.16。

卡贝缩宫素结构与天然缩宫素的结构不同之处是其N-端的环状结构：天然缩宫素是通过两个半胱氨酸的侧链巯基形成二硫键成环，而卡贝缩宫素将N-末端的半胱酸用丁酸替代后与另一个半胱氨酸的侧链巯基形成硫醚键成环，因为硫醚键比二硫键更稳定，不易被酶降解，所以卡贝缩宫素比缩宫素更稳定性，生物活性更强。

目前国内注册的卡贝缩宫素有瑞典PolyPeptide Laboratories 公司的卡贝缩宫素原料药（H20070232）和加拿大辉凌制药的卡贝缩宫素注射液（商品名巧特欣），尚无国产卡贝缩宫素原料药和制剂上市。卡贝缩宫素注射液用于选择性硬膜外或腰麻下剖腹产术后,以预防子宫收缩乏力和产后出血。单剂量静脉注射100μg(1mL)卡贝缩宫素, 只有在硬膜外或腰下剖腹产术完成婴儿娩出后, 缓慢地在1分钟内一次性给予。卡贝缩宫素可以在胎盘娩出前或娩出后给予。

由于卡贝缩宫素的化学结构独特，导致其合成难度大。目前报道的卡贝缩宫素合成方法收率低或采用的试剂昂贵，生产成本高。

发明内容

本发明的目的是提供一种卡贝缩宫素的合成工艺，该卡贝缩宫素的合成工艺每步氨基酸缩合率能达到99.5%以上，线性粗肽的纯度可达到90%左右，成品纯度可达达到99.0%以上，最终产品的总收率超过35%，且防止产生的聚合副反应，极大的简化工艺路线，降低了生产成本，提高了合成效率，且成品纯度高，便于规模化生产，同时有利于环保，有着显著的经济社会效益。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种卡贝缩宫素的合成工艺，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、以AM Resin为起始载体，在缩合试1-羟基苯并三唑（HOBT）和N,N'-二异丙基碳二亚胺（DIC）的作用下，偶联Rink Amide-AM Linker，制得Rink Amide-AM Resin，此Rink Amide-AM Resin替代度为sub=0.7~0.8 mmol/g；

步骤二、采用固相多肽逐步缩合法，根据肽序从C端至N端，首先将Fmoc-Gly-OH与步骤一Rink Amide-AM Resin偶联反应获得Fmoc-Gly-Rink Amide-AM Resin；

步骤三、去除步骤二Fmoc-Gly-Rink Amide-AM Resin的保护基Fmoc，从而获得H-Gly-Rink Amide-AM Resin；

步骤四、采用固相多肽逐步缩合法逐步依次完成H-Gly-Rink Amide-AM Resin与Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(Me)-OH的偶联，甲醇收缩合成卡贝缩宫素的前体肽Fmoc-Tyr(me)--Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-RinkAmide-AM Resin；