[发明专利]用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱

说明书

本发明的课题在于，提供一种使用聚凝胺作为红细胞凝集剂、使用胶体金缀合物作为检测试剂时，将全血中的红细胞凝集并分离除去并且不引起胶体金的凝集的免疫色谱用测试条；以及利用免疫色谱的检测方法。本发明人们为了解决上述课题，并非进行聚阴离子的种类、量的选定，而是从完全不同的观点出发，审视了此前的试剂构成本身并对各要素进行了深入研究，结果惊奇地发现，通过使用特定的添加剂，在不基于聚阴离子进行中和的情况下也能够抑制胶体金的凝集。

技术领域

本发明涉及用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱。更详细而言，涉及：为了即使在以聚阳离子为有效成分的红细胞凝集剂共存在测定体系中时也不会因该红细胞凝集剂的存在导致作为检测试剂的胶体金缀合物发生非特异性凝集而用特定添加剂进行了处理的测试条；以及使用该测试条的免疫色谱。

背景技术

近年，在诊所或小规模医院中，“想在患者诊察期间获知检查结果”的需求在增加，正在由以前的委托院外进行检查向即时检查(Point of Care Testing，POCT)转变。随着POCT的普及，已在使用收纳有侧流式免疫色谱用测试条的设备作为体外诊断药。就免疫色谱用测试条而言，不需要在检查时制备试剂，仅通过将血液或尿等被检试样(以下有时称为“样品”)直接滴加到该测试条上等简单操作即能够对样品中的对象物进行检测，对于简便且迅速地分析检测对象物而言是非常有用的。

免疫色谱用测试条(以下有时称为“测试条”)通常为具备样品供给部、展开部、检测部的多孔性的膜，其结构如下：针对检测对象物的标记抗体等检测试剂(以下有时称为“缀合物”)以能够溶出、展开的方式保持于展开部的展开起始部位，从而与样品接触后能够通过展开部并到达检测部，进而固定化抗体被固定在展开部的局部，构成检测部。这里，当样品滴加到样品供给部时，样品中的检测对象物与标记抗体特异性结合，形成复合物，该复合物在展开部向着下游方向逐渐展开，进而与固定化抗体结合。因此，通过在抗体固定化部分对由标记抗体、检测对象物和固定化抗体形成的三明治型复合物进行检测，从而能够对检测对象物进行定性或定量分析。构成缀合物的标记物的一例为胶体金粒子，通过胶体金粒子的显色反应能够进行定性检测。进一步地，基于其显色程度，还能够定量地检测样品中的检测对象物。

但是，在前述样品为全血时存在如下问题：全血中的红细胞不能在多孔性的膜中移动而将膜孔堵塞，妨碍样品的展开。因此，在以全血为样品的情况下，需要预先从全血中分离除去红细胞，作为这样的方法，已知如下方法：在测定前，通过离心分离使红细胞沉降并除去的方法；在测定前或者测定开始时，通过红细胞分离剂使红细胞凝集并过滤除去的方法。

作为前述红细胞分离剂，已知有例如海美溴铵(以聚凝胺的商品名流通。以下有时简称聚凝胺)(专利文献1、2、3)。

专利文献1中，作为由合成的水溶性聚合物形成的红细胞凝集剂的一例，而列举了聚凝胺。

专利文献2中，记载了一种色谱用玻璃纤维制血细胞分离膜，其含有聚凝胺作为红细胞凝集化物质。并且公开了如下技术：单独聚凝胺的情况下，血液通过血细胞分离膜时伴随有溶血，为了避免该溶血，用PVA被覆前述血细胞分离膜。

这样，虽然聚凝胺作为红细胞凝集剂是广泛已知的，但将聚凝胺用于将金属缀合物用作检测试剂的免疫色谱的情况下，存在不仅使全血中的红细胞凝集而且还使金属缀合物凝集的问题(专利文献3)。

专利文献3中公开了用于防止这样的金属缀合物的凝集的技术。即，开发了一种免疫色谱分析设备，其中，使作为红细胞分离剂的聚凝胺等聚阳离子结合于色谱载体的上游，在其下游结合有用于中和聚阳离子的聚阴离子。根据该技术，聚阳离子的正电荷被聚阴离子的负电荷中和，因此可以防止含硒的金属缀合物凝集。

以往技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平3-205563号公报

专利文献2：日本特开平5-099918号公报