[发明专利]细胞培养方法

说明书

本发明涉及用于生成适合于对需要治疗性细胞或组织处理的哺乳动物进行治疗性应用的细胞和组织组合物的方法。具体而言，本发明涉及培养供疗法中使用的细胞的方法，该方法包括(i)在包含第一血清、血清替代物和/或血清级分的第一细胞培养基中培养细胞的样品，并(ii)在收获供疗法中使用的细胞前，在包含第二血清、血清替代物和/或血清级分的第二细胞培养基中培养细胞。

领域

本发明涉及用于细胞和组织疗法的新颖且改善的方法和组合物。本发明涉及用于生成细胞和组织组合物的方法，所述细胞和组织组合物适合于对需要治疗性细胞或组织处理的哺乳动物的治疗性应用。

背景

细胞疗法是一种用于几类病症、损伤、恶性和疾病的越来越重要的治疗。细胞疗法牵涉对患者输注、应用或移植细胞，其中输注、应用或移植的细胞自与患者不同的供体(同种)或自患者自身(自体)衍生。间充质基质细胞(MSC)是已经在治疗性用途方面显示希望的一种细胞类型。

尽管它们有希望，至今用MSC获得的临床结果一般已经是较差的。这些较差临床结果的主要原因似乎是由于生成MSC的方式。例如，大多数MSC在胎牛血清中培养，然后仅通过清洗收获后的细胞除去所述胎牛血清。然而，此简单清洗不能除去附着于细胞表面的牛蛋白质或位于细胞内，后来可以掺入外部细胞表面中的那些牛蛋白质。在植入后，这些细胞然后会对其血液中存在针对牛蛋白质的抗体的患者(发生率约40-50％澳大利亚群体)表现为外来的，被患者的免疫系统识别并且在投递其治疗益处前破坏。

如此，不断需要生成用于细胞疗法的细胞的方法。

概述

本发明人已经发现了可以以如下的方式生成细胞，使得改善或解决目前生成方法的问题，其已经导致增强的临床结果。

因而，在第一个方面中，本发明提供了培养供疗法中使用的细胞的方法，其包括下述步骤：

(i)在包含第一血清、第一血清替代物和/或第一血清级分的第一细胞培养基中培养细胞样品达足够的时间以使所述细胞能够实现期望水平的扩充；并

(ii)在收获供疗法中使用的细胞前，用包含第二血清、第二血清替代物和/或第二血清级分的第二细胞培养基替换所述第一细胞培养基，并且将所述细胞再培养一段时间。

在第二个方面中，本发明提供了培养供细胞疗法中使用的人间充质基质细胞的方法，其包括下述步骤：

(i)在包含补充有热灭活的胎牛血清(HIFCS)的DMEM的第一细胞培养基中培养间充质基质细胞，直至所述细胞达到约70-85％汇合；并

(ii)在收获供疗法中使用的细胞前约24小时，除去所述第一细胞培养基并用包含无酚红的DMEM和约2％人血清清蛋白的第二细胞培养基替换，然后将所述细胞再培养约24小时。

在第三个方面中，本发明提供了培养供细胞疗法中使用的人间充质基质细胞的方法，其包括下述步骤：

(i)在包含补充有热灭活的胎牛血清(HIFCS)的DMEM的第一细胞培养基中培养介于每cm²培养容器1.0x 10³个细胞和每cm²培养容器1.0x 10¹⁰个细胞之间的间充质基质细胞，直至所述细胞达到约70-85％汇合；并

(ii)在收获供疗法中使用的细胞前约24小时，除去所述第一细胞培养基并用包含无酚红的DMEM和约2％人血清清蛋白的第二细胞培养基替换，然后将所述细胞培养所述约24小时。

在第四个方面中，本发明提供了用于制备供患者中的同种细胞疗法用的细胞的方法，其包括下述步骤：

(i)提供来自健康供体的细胞样品；