[发明专利]干转染组合物及其制备和使用方法

说明书

相关申请的交叉引用

根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2013年11月5日提交的美 国临时专利申请序列No.61/900,232的申请日期的优先权，所述申请 的公开内容通过引用并入本文。

引言

能够有效引入外源分子，诸如DNA、siRNA、蛋白质等至生物 细胞中在生物学和生物工程中是非常重要的。转染是指转移核酸至细 胞中。用核酸分子有效转染生物细胞是阐明基因功能如何在复杂的细 胞环境中起作用和可如何调控其活性以用于治疗干预的必要前提。细 胞转染通常用于基础生物学研究和药学开发中。

可将核酸通过将核酸与带电脂质、类脂质、肽、聚合物或其混合 物预先复合而体外和体内递送至细胞。此类转染试剂可商购获得并且 广泛用于递送核酸至培养中的细胞。暴露于转染试剂-核酸复合物的 细胞可通过内吞或其它方式内化这些复合物。

概述

提供干聚合转染剂组合物，如冻干聚合转染剂组合物。所述干组 合物包含聚合转染剂和缓冲液。在一些情况下，所述组合物还包含一 种或多种核酸。还提供了制备和使用所述组合物的方法，以及包括所 述组合物的试剂盒。

附图简述

图1描绘了为了测定转染效率而在转染后72小时转染细胞的荧 光激活细胞分选(FACS)分析的结果。阳性细胞％表示为条形图(左Y- 轴)并且平均荧光强度(MFI)表示为线图(右Y-轴)。

图2描绘了为了测定产生的慢病毒量而由冻干包装组分产生的 慢病毒储液的定量RT-PCR(qRT-PCR)的结果。

图3描绘了为了测定产生的慢病毒滴度而用冻干包装组分产生 的慢病毒储液的每ml测定感染单位(IFU/ml)的结果。

图4描绘了当用另外的样品再测试一次时(N＝8液体；N＝13干燥)， 测定由冻干包装组分产生的慢病毒储液的转染效率(上图：阳性细胞％ 和MFI)和拷贝/ml的病毒(下图：qRT-PCR)的结果。

图5提供了根据本发明的一个实施方案的多孔基质的图。

详述

提供了干聚合转染剂组合物，如冻干聚合转染剂组合物。所述干 组合物包含聚合转染剂和缓冲液。在一些情况下，所述组合物还包含 一种或多种核酸。还提供了制备和使用所述组合物的方法，以及包括 所述组合物的试剂盒。

在详细描述本公开的方法之前，应理解所述方法不限于所述的特 定实施方案，因此当然可以发生变化。还应当理解，本文所用的术语 只是为了描述特定实施方案，并非旨在进行限制，因为本发明的范围 将只由所附权利要求书限定。

当提供数值范围时，应理解该范围的上限和下限之间的每个居间 数值(至下限单位的十分之一，除非本文另外清楚地规定)以及所述范 围内的任意其它所述或居间的数值都涵盖在本方法中。这些较小范围 的上限和下限可独立地包括在该较小的范围内，并且也涵盖在本方法 中，服从于所述范围内的任何特别排除的限值。当所述范围包括上下 限值之一或两者时，排除那些所包括的界限之一或两者的范围也包括 在本方法中。

本文中提供了某些在数值之前加有术语“约”的范围。术语“约”在 本文中用于为其之后的确切数字以及与所述术语之后的数字接近或 近似的数字提供文字支持。在确定数字是否与明确引用的数字接近或 近似中，接近或近似的未引用的数字可以是在其出现的上下文中提供 明确引用的数字的基本等同物的数字。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本方法 所属领域中普通技术人员通常所理解的相同含义。虽然类似于或等同 于本文所述的那些方法和材料的任何方法和材料也可用于实践或检 验本发明，但现在描述代表性说明方法和材料。

本说明书中引用的所有公布和专利通过引用并入本文，就如同特 定地及个别地表明各个公布或专利通过引用并入，并且通过引用并入 本文以公开和描述与公布一起被引用的方法和/或材料。任何公布的 引用是针对其提交日期之前的公开内容，并且不应当解释为本发明无 权先于因先前发明所作的此类披露。此外，提供的公布的日期可与可 能需要独立确认的实际公布日期不同。