[发明专利]用于苯丙酮尿症的MRNA疗法

说明书

相关申请

本申请要求于2013年10月22日提交的美国临时申请系列No.61/894,303的优先 权，其公开内容在此通过引用并入。

序列表

本说明书引用了序列表(于2014年10月22日以电子方式提交为名称为“2006685- 0692_SL.txt”的.txt文件)。该.txt文件于2014年10月20日生成，并且大小为18,455字节。 该序列表的全部内容通过引用并入本文。

背景

苯丙酮尿症(PKU)是一种常染色体隐性代谢性遗传病，其特征在于，肝酶苯丙氨酸 羟化酶(PAH)的基因突变，导致其无功能。PAH是将氨基酸苯丙氨酸(Phe)代谢成氨基酸酪氨 酸所必需的。当PAH活性降低时，苯丙氨酸积累，并被转化成苯丙酮酸(也称为苯丙酮)。如果 不进行治疗，PKU可导致精神迟缓、癫痫和其它严重的医学问题。目前，没有用于该疾病的疗 法，并且护理标准通过饮食管理来进行，尽量减少含大量蛋白的食物。

发明概述

本发明除了其它方面还提供了用于基于mRNA疗法来有效治疗苯丙酮尿症(PKU)的 方法和组合物。本发明部分地基于使用PKU疾病模型的成功的动物研究。例如，如在下文实 施例部分中更详细描述的，施用封装于脂质体内的编码人PAH蛋白的mRNA导致血清、肝以及 其它体内临床相关组织中的高效的蛋白质产生。更重要并且令人意想不到的是，用PAH mRNA治疗PAH敲除小鼠(一种PKU疾病模型)可在给药六小时内有效地将苯丙氨酸水平降低 至野生型水平。因此，本发明人已经显示本文所述的mRNA疗法可高效治疗PKU。

在一个方面，本发明提供了治疗PKU的方法，包括以使PKU的至少一个症状或特征 在强度、严重程度或频率上降低或延迟发作的有效剂量和施用间隔施用包含编码苯丙氨酸 羟化酶(PAH)的mRNA的组合物至需要治疗的受试者。

在另一个方面，本发明提供了用于治疗苯丙酮尿症(PKU)的组合物，包含封装于脂 质体内的有效剂量量的编码苯丙氨酸羟化酶(PAH)的mRNA。

在一些实施方案中，所述mRNA封装于脂质体内。在一些实施方案中，合适的脂质体 包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质和 一种或多种PEG-修饰的脂质。

在一些实施方案中，所述一种或多种阳离子脂质选自由以下组成的组：C12-200、 MC3、DLinDMA、DLinkC2DMA、cKK-E12、ICE(基于咪唑的)、HGT5000、HGT5001、DODAC、DDAB、 DMRIE、DOSPA、DOGS、DODAP、DODMA和DMDMA、DODAC、DLenDMA、DMRIE、CLinDMA、CpLinDMA、 DMOBA、DOcarbDAP、DLinDAP、DLincarbDAP、DLinCDAP、KLin-K-DMA、DLin-K-XTC2-DMA、 HGT4003及其组合。

在一些实施方案中，所述一种或多种阳离子脂质包括式I-c1-a的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个R²独立地为氢或C_1-3烷基；

每个q独立地为2至6；

每个R'独立地为氢或C_1-3烷基；

并且每个R^L独立地为C_8-12烷基。

在一些实施方案中，所述一种或多种阳离子脂质包括cKK-E12：