[发明专利]用于单分子检测的测定及其应用

权利要求书

1.一种检测来自受试对象的遗传样品中的遗传变异的方法，所述方法包括

使第一探针组和第二探针组与所述遗传样品接触，其中，所述第一探针组包含第 一标记探针和第一标签探针，所述第二探针组包含第二标记探针和第二标签探针，

使第一探针组和第二探针组的至少一部分分别与所述遗传样品的核苷酸分子中 的第一目标核酸区和第二目标核酸区杂交，

至少通过将第一标记探针和第一标签探针连接而连接第一探针组，

至少通过将第二标记探针和第二标签探针连接而连接第二探针组，

可选地扩增经连接的探针组，

将所述标签探针固定至基板上的预定位置，其中

连接至经固定的标签探针的第一标记探针和第二标记探针和/或其经扩增的 标记探针分别包含第一标记和第二标记，

第一标记和第二标记是不同的，

经固定的这些标记是光学上能够解析的，

经固定的第一标签探针和第二标签探针和/或其经扩增的标签探针分别包含 第一标签和第二标签，和

所述固定步骤通过将所述标签固定至所述预定位置来进行，

对(i)固定至所述基板的第一标记的第一数量和(ii)固定至所述基板的第二标记的 第二数量进行计数，和

比较所述第一数量和第二数量以确定所述遗传样品中的遗传变异。

2.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括：在所述接触步骤之前，分别用 第一标记和第二标记来标记第一标记探针和第二标记探针。

3.如权利要求1～2中任一项所述的方法，所述方法还包括：在所述接触步骤之 前，分别用第一标签和第二标签来给第一标签探针和第二标签探针加标签。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述方法包括：在扩增期间扩 增所述经连接的探针组，同时标记或不标记所述探针。

5.如权利要求1所述的方法，其中

第一标记探针和第二标记探针各自包含正向引发序列或反向引发序列，第一标签 探针和第二标签探针各自包含相应的反向引发序列或正向引发序列和作为标签的标 签核苷酸序列，

所述方法包括扩增经连接的探针组，

扩增步骤包括扩增：(i)带有分别杂交至正向引发序列和反向引发序列的第一正向 引物和第一反向引物的经连接的第一标记探针和第一标签探针，其中杂交至第一标记 探针的第一正向引物或第一反向引物包含所述第一标记，和(ii)带有分别杂交至正向 引发序列和反向引发序列的第二正向引物和第二反向引物的经连接的第二标记探针 和第二标签探针，其中杂交至第二标记探针的第二正向引物或第二反向引物包含所述 第二标记，

将标签探针的经扩增的标签核苷酸序列固定至基板上的预定位置，其中第一标签 探针和第二标签探针的经扩增的标签核苷酸序列是第一标签和第二标签，

所述第一数量是固定至所述基板的经扩增的第一探针组中的第一标记的数量，所 述第二数量是固定至所述基板的经扩增的第二探针组中的第二标记的数量。

6.如权利要求1所述的方法，其中

第一标记探针和第二标记探针各自包含反向引发序列，第一标签探针和第二标签 探针各自包含作为标签的标签核苷酸序列，

所述方法包括扩增经连接的探针组，

所述扩增步骤包括扩增：(i)带有与第一标记探针的第一反向引发序列杂交的第一 反向引物的经连接的第一标记探针和第一标签探针，其中所述第一反向引物包含所述 第一标记，和(ii)带有与第二标记探针的第二反向引发序列杂交的第二反向引物的经 连接的第二标记探针和第二标签探针，其中所述第二反向引物包含所述第二标记，

将标签探针的经扩增的标签核苷酸序列固定至基板上的预定位置，其中第一标签 探针和第二标签探针的经扩增的标签核苷酸序列是第一标签和第二标签，

所述第一数量是固定至所述基板的经扩增的第一探针组中的第一标记的数量，所 述第二数量是固定至所述基板的经扩增的第二探针组中的第二标记的数量。