[发明专利]神经元干细胞分化

权利要求书

1.从至少一种能够谱系特异性分化的前体细胞产生神经细胞的 神经细胞分化培养基，其包含以下或由以下组成：

i)至少一种细胞培养基础培养基；

ii)至少一种用于神经细胞培养的无血清添加剂；

iii)细胞周期抑制剂；

iv)至少一种原肌球蛋白受体激酶B[TrkB]受体激动剂；

v)经典Wnt通路激动剂；

vi)抗坏血酸或维生素C或其盐或衍生物；以及

vii)钙离子的溶液。

2.如权利要求1所述的神经细胞分化培养基，其还包含以下至少 一种或多种或由以下至少一种或多种组成，包括其所有的组合：

viii)notch信号转导抑制剂；

ix)CREB(cAMP反应元件结合蛋白)激活剂；

x)γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂；以及

xi)非经典WNT通路激动剂。

3.如权利要求1或2所述的神经分化培养基，其中所述细胞培养 基础培养基选自DMEM、DMEM:F12。

4.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述无 血清添加剂选自：N2添加剂、B27添加剂、谷氨酰胺添加剂、 NeuroBrew^TM。

5.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述周 期抑制剂为G1/S细胞检查点的抑制剂。

6.如权利要求5所述的神经分化培养基，其中所述细胞周期抑制 剂选自：PD0332991、AZD5438、黄芩素、CI898三盐酸盐、大豆黄 素、WYE687二盐酸盐、YC1、夫拉平度、indisulam、purvalanol、 seliciclib、含羞草碱、purvalanol。

7.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述原 肌球蛋白受体激酶B[TrkB]受体激动剂为脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养蛋白-4(NT-4)、神经胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)、或以上的类似物。

8.如权利要求7所述的神经分化培养基，其中所述原肌球蛋白受 体激酶B[TrkB]受体激动剂选自：7,8-二羟基黄酮、N,N',N”-三(2-羟乙 基)-1,3,5-苯三甲酰胺(LM22A4)、4′-二甲氨基-7,8-二羟基黄酮。

9.如前述权利要求中任一项所述的神经分化培养基，其中所述经 典Wnt通路激动剂为糖原合成酶激酶3β(GSK3β)抑制剂。

10.如权利要求9所述的神经分化培养基，其中所述经典Wnt通 路激动剂选自：CHIR99021、(2'Z,3'E)-6-溴靛红-3'-肟(BIO)、(2'Z,3'E)-6- 溴靛红-3'-丙酮肟(BIO-丙酮肟)、5-乙基-7,8-二甲氧基-1H-吡咯并[3,4-c] 异喹啉-1,3(2H)-二酮(3F8)、1-(7-甲氧基喹啉-4-基)-3-[6-(三氟甲基)吡 啶-2-基]尿素(A1070722)、N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N'-(5-硝基-2-噻唑 基)尿素(AR-A014418)、3-(2,4-二氯苯基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-1H- 吡咯-2,5-二酮(SB216763)、3-[(3-氯-4-羟苯基)氨基]-4-(2-硝基苯 基)-1H-吡咯-2,5-二酮(SB415286)、N-(3-氯-4-甲苯基)-5-(4-硝基苯 基)-1,3,4-噁二唑-2-胺(TC-G24)、2-甲基-5-[3-[4-(甲基亚硫酰基)苯 基]-5-苯并呋喃基]-1,3,4-噁二唑(TCS2002)或3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基苯酚双三氟乙酸酯(TWS119)。

11.如权利要求2-13中任一项所述的神经分化培养基，其中所述 notch信号转导抑制剂为γ-分泌酶抑制剂。