[发明专利]在用于检测多聚靶分子的基于颗粒的测试中防止聚集的试剂、方法和设备

说明书

本发明涉及在用于检测样品中包含两个或多个类似或相同表位的多表位靶分析物和/或用于确定样品中多表位靶分析物的浓度的测试中防止检测颗粒聚集的方法，其中所述方法包括应用能够特异性结合到多表位分析物上的至少一个表位的第一捕获实体的步骤，其特征在于所述第一捕获实体阻断至少一个表位结合到检测颗粒。本发明进一步涉及其中多表位靶分析物的检测包括使用第二捕获实体的方法，所述第二捕获实体可以如第一捕获实体那样特异性结合到多表位靶分析物的相同或相似表位。还预期到用于检测所述多表位靶分析物的方法，该方法在包括传感器表面的系统中的执行并且使用第一捕获实体以阻断至少一个表位结合到检测颗粒，诸如磁检测颗粒。

技术领域

本发明涉及在用于检测样品中包含两个或多个类似或相同表位的多表位靶分析物和/或用于确定样品中多表位靶分析物的浓度的测试中防止检测颗粒聚集的方法，其中所述方法包括应用能够特异性结合到多表位分析物上的至少一个表位的第一捕获实体的步骤，其特征在于所述第一捕获实体阻断至少一个表位结合到检测颗粒。本发明进一步涉及其中多表位靶分析物的检测包括使用第二捕获实体的方法，所述第二捕获实体可以如第一捕获实体那样特异性结合到多表位靶分析物的相同或相似表位。还预期到用于检测所述多表位靶分析物的方法，在包括传感器表面的系统中执行该方法以及使用第一捕获实体以阻断至少一个表位结合到检测颗粒，诸如磁检测颗粒。

背景技术

对普遍且有效的医疗护理的需求使得体外诊断学的世界朝向集成随机访问和床旁护理(point-of care)解决方案发展。此类解决方案的实现要求较高：测试需要是快速、灵敏、定量且准确的。此外，在其上执行测试的平台需要易于使用且简洁。

亲和力测定使用生物分子来从样品中捕获特异性靶分子并且允许确定其浓度。通常，通过将涂敷有捕获分子的纳米颗粒或微粒分散至样品流体中来实现亲和力捕获(Luchini 等人, 2008, Nano Lett., 8(1), 350 - 361)。因此，典型的基于亲和力的测定在海量应用中使用，诸如诊断学测定、在研究中检测生物分子，诸如蛋白、肽和核酸，由此使用亲和分子，诸如例如抗体，其通常通过对特定生物分子的高结合亲和力来表征。原则上，官能化的颗粒，例如磁颗粒，被吸引至传感器表面，在那里颗粒可以间接（即借助于捕获的分析物）或直接结合到捕获探针，诸如印刷在表面上的抗体。结合的颗粒数目与样品中存在的靶分子的数量正相关或反相关。通常，在此类生物传感器应用中，可以使用对接近表面的颗粒灵敏的任何技术来检测颗粒；通常此类技术基于光学检测，诸如检测散射光或受抑全内反射（FTIR），如例如Bruls 等人, Lab Chip, 2009, 9. 2504-3510中所述。

然而，如现有技术中描述的此类亲和力测定的重要缺点是这一事实，即在靶分子以多聚形式存在或提供大量相似或相同表位的情况下，多个颗粒可以结合到同一靶分子，其可导致形成珠粒-靶聚集体，即以群聚。这可能显著减低颗粒（例如磁颗粒）的数目，所述颗粒可能与表面紧密接触并且因此可能降低测定的灵敏度。此外，此类聚集过程可以以不可重现的方式发生，因此导致测定结果不准确。

因此，存在提供在多聚或多表位靶分子存在的情况下防止颗粒群聚的手段和方法的需求。

发明内容

本发明针对这些需求并且提供在多聚或多表位靶分子存在的情况下防止颗粒群聚的手段和方法。上述目标具体通过在用于检测样品中包含两个或多个相似或相同表位的多表位靶分析物和/或用于确定样品中所述多表位靶分析物的浓度的测试中防止检测颗粒聚集的方法来实现，其中所述方法包括应用能够特异性结合到所述多表位分析物上的至少一个表位的第一捕获实体的步骤，其特征在于所述第一捕获实体阻断至少一个表位结合到检测颗粒。此类第一捕获实体的采用导致大部分相似或相同表位覆盖在靶分析物上并且仅留下一小部分或单一表位。这些少数表位是自由的并且可以随后或同时通过能够与检测颗粒相互作用的另外捕获实体而结合。由此，有效地防止以其他方式几乎不可避免的检测颗粒的群聚。这导致测定或相应的检测方法的灵敏度的显著增加，并且还改进测定/检测方法的再现性，因而增加测定/检测方法准确性。