[发明专利]收集和扩增循环核酸的方法和装置

权利要求书

1.一种扩增存在于生物学样本的非-细胞部分中的循环核酸的方法，所述方法包括：

过滤所述生物学样本以从完整细胞中分离非-细胞部分；

将分离的非-细胞部分收集到干燥的固体基质上；

从收集的非-细胞部分提取循环核酸；

环化提取的循环核酸以形成单链核酸环；和

经由随机-引物滚环扩增来扩增单链核酸环，以形成扩增的循环核酸产物。

2.权利要求1的方法，其还包括在提取之前将收集的非-细胞部分干燥至基本上干燥的状态。

3.权利要求1的方法，其还包括在环化前使提取的循环核酸变性。

4.权利要求2的方法，其中所述环化使用TS2126RNA连接酶进行。

5.权利要求1的方法，其还包括检测扩增的循环核酸产物中特定循环核酸序列的存在、缺失或量。

6.权利要求1的方法，其中所述生物学样本是全血，和所述非-细胞部分是血浆或血清。

7.权利要求6的方法，其中血浆或血清从少于150μL的全血收集。

8.权利要求6的方法，其中血浆或血清在不存在抗凝血剂的情况下从全血分离。

9.权利要求1的方法，其中所述循环核酸是循环DNA或循环RNA。

10.权利要求9的方法，其中所述循环DNA包括源自肿瘤的DNA、源自胎儿的DNA、源自捐赠器官的DNA、源自移植细胞的DNA、源自移植组织的DNA，或其组合。

11.权利要求9的方法，其中所述循环DNA包括源自肿瘤的DNA。

12.权利要求1的方法，其中生物学样本的过滤通过使用孔径在0.01微米和5微米之间的膜进行。

13.权利要求12的方法，其中生物学样本的过滤通过使用孔径在1微米和2微米之间的膜进行。

14.权利要求1的方法，其中所述干燥的固体基质是没有任何去垢剂的纤维素基质。

15.权利要求1的方法，其中所述干燥的固体基质用离液盐浸渍。

16.权利要求4的方法，其中所述生物学样本是全血，所述循环核酸是存在于全血中的循环DNA和所述干燥的固体基质是没有任何去垢剂的纤维素基质，和其中全血的非-细胞部分经由通过孔径在1微米和2微米之间的过滤膜过滤分离。

17.一种在收集点处理全血以收集血浆或血清的方法，所述方法包括：

在收集点过滤全血以分离血浆或血清；

将分离的血浆或血清收集到干燥的固体基质上，其中干燥的固体基质没有任何去垢剂；和

在干燥的固体基质中干燥收集的血浆或血清。

18.权利要求17的方法，其中血浆或血清在不存在抗凝血剂的情况下，经由通过过滤膜的过滤从全血中分离。

19.权利要求18的方法，其中干燥的固体基质是用离液盐浸渍的纤维素基质。

20.权利要求19的方法，其还包括贮存干燥的血浆或血清。

21.一种从干燥的血浆或血清样本检测循环核酸的方法，所述方法包括：

从干燥的血浆或血清样本提取循环核酸；

进行提取的循环核酸的全基因组扩增，以生成扩增的循环核酸产物；和

检测在扩增的循环核酸产物中特定循环核酸序列的存在、缺失或量。

22.权利要求21的方法，其中提取的循环核酸的全基因组扩增包括：

使用单链-特异性连接酶环化提取的循环核酸以形成单链核酸环；和

经由随机-引物滚环扩增来扩增单链核酸环。

23.一种从生物学样本收集含有循环核酸的非-细胞部分的装置，所述装置包括：

被配置以将非-细胞部分与完整细胞分离的过滤膜；和

被配置以收集分离的非-细胞部分的干燥的固体基质，其中所述干燥的固体基质没有任何去垢剂，和其中所述过滤膜和干燥的固体基质被配置以在它们之间建立一种直接的接触。

24.权利要求23的装置，其中所述过滤膜包括样本应用区和传送区，和其中所述固体基质直接地接触过滤膜的传送区。