[发明专利]使用其中进行了调控使赖氨酰-tRNA合成酶被表达或不被表达的细胞或球状聚集的细胞的培养筛选癌症转移抑制剂的方法

权利要求书

1.一种用于筛选癌转移抑制剂的方法，所述方法包括以下步骤：

1)在三维环境中或在由细胞外基质包围的环境中培养其中进行调控使赖氨酰-tRNA合成酶(KRS)被表达或不被表达的癌细胞系或聚集的癌细胞；

2)用步骤1)的所述癌细胞系或所述聚集的癌细胞处理样品；

3)分析步骤2)的所述癌细胞系或所述聚集的癌细胞中的KRS的活性；以及

4)选择步骤3)中已确定能抑制KRS活性的所述样品。

2.根据权利要求1所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，步骤1)中的所述三维环境是液态环境或胶原蛋白包围的环境。

3.根据权利要求1所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，步骤1)的所述癌细胞系或聚集的癌细胞是转移性癌或转移诱导性癌。

4.根据权利要求3所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，所述转移性癌优选选自由结肠直肠癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、骨癌、肺癌、胰腺癌、头/颈癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、食管癌、小肠肿瘤、肛门癌、结肠癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金氏病、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌和中枢神经系统肿瘤组成的组。

5.根据权利要求1所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，步骤2)的所述样品优选选自由肽、蛋白质、非肽化合物、抗体、抗体片段、活性化合物、发酵产物、细胞提取物、植物提取物、动物组织提取物和血浆组成的组。

6.根据权利要求1所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，步骤3)中的所述KRS活性是癌细胞中的活性，所述活性优选选自由癌细胞的细胞-细胞粘附、细胞-细胞外基质(ECM)粘附、细胞分散、伤口愈合、改变细胞粘附信号传导因子的活性、c-Jun/桩蛋白启动子结合，和细胞从球状体细胞的播散组成的组。

7.根据权利要求6所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，所述细胞-细胞粘附诱导上皮标记物或间充质标记物的表达或表达位置的变化或细胞分散，所述上皮标记物选自由ZO-1、封闭蛋白、CK14、β-连环蛋白或E-钙粘蛋白组成的组，所述间充质标记物选自由纤连蛋白、twist蛋白、波形蛋白、α-SMA(平滑肌肌动蛋白)、snail-1蛋白、Slug蛋白或N-钙粘蛋白组成的组。

8.根据权利要求6所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，所述细胞-细胞外基质粘附诱导细胞-细胞外基质粘附强度、细胞伸展、粘着斑和其破坏、肌动蛋白重建以及磷酸化的FAK、c-Src、ERK或桩蛋白的表达或表达位置的变化。

9.根据权利要求6所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，所述细胞粘附信号传导活性诱导FAK、c-Src、ERK、c-Jun或桩蛋白的表达或磷酸化的降低或变化，或诱导整合素α6轭合的变化。

10.根据权利要求1所述的用于筛选癌转移抑制剂的方法，其中，步骤3)中分析所述KRS的活性通过选自由免疫印迹法、实时PCR、免疫共沉淀、ChIP(染色质免疫沉淀)、FRET、免疫荧光检测以及免疫组织化学组成的组中的方法来进行。

11.一种用于监测癌细胞从癌细胞系或聚集的癌细胞的播散、癌细胞的上皮-间充质转化、迁移、浸润和转移，以及相关信号传导因子的表达和活性的方法，所述方法包括以下步骤：

1)在三维环境中或在由细胞外基质包围的环境中培养其中进行调控使赖氨酰-tRNA合成酶(KRS)被表达或不被表达的癌细胞系或聚集的癌细胞；

2)分析步骤1)的所述癌细胞系或所述聚集的癌细胞中的KRS的活性；以及

3)基于步骤2)分析的KRS活性来分析所述癌细胞系或所述聚集的癌细胞的转移水平。

12.根据权利要求11所述的用于监测癌细胞的播散的方法，其中，步骤1)中的所述三维环境是液态环境或胶原蛋白包围的环境。

13.根据权利要求11所述的用于监测癌细胞的播散的方法，其中，步骤1)的所述癌细胞系或聚集的癌细胞是转移性癌或转移诱导性癌。