[发明专利]微生物检测方法

说明书

提供对含有多种抗菌性物质的中药提取物制剂、生药，在同一试验条件下可适用于特定微生物试验和活菌数试验这两者而通用性高、能够有效地降低被测试样中的抗菌性物质的影响、可高精度地检测对象微生物的微生物检测方法。一种具有抗菌活性的被测试样中的微生物检测方法，其特征在于，包括：制备含有具有抗菌活性的被测试样的试样液的工序和用培养基培养对象微生物的工序，在所述微生物检测方法中，使(甲基)丙烯酸酯系合成吸附剂作用于试样液和/或培养基。

技术领域

本发明涉及微生物检测方法，更详细而言，涉及可降低被测试样中所含的抗菌性物质的影响、高精度地检测对象微生物的微生物检测方法。

背景技术

在食品、医药品等领域中，为了确保质量、安全性，进行产品、原料的微生物检查。对于其试验方法，各领域中规定了官方方法，对于医药品，日本药典中收载了各种微生物试验方法。其中，对于非无菌制剂及其原料，规定了微生物限度试验法，其中包括测量活菌数的活菌数试验和与特定的病原性微生物等相关的特定微生物试验。进而，对于生药，一般试验法5.02中的生药试验法中规定了生药的微生物限度试验法。但是，在将微生物限度试验法应用到中药提取物制剂及作为其原料的生药的情况下，因它们中所含的抗菌性物质(包含抗真菌性物质，以下同样)的影响而对象微生物的生长繁殖受到抑制，因此存在无法准确地检测对象微生物的问题。

为了除去被测试样的抗菌活性，通常想到的是将抗菌活性灭活(抑制物质的中和)、提高试样液的稀释率或者增加培养基的量、膜过滤等。但是，由于中药提取物制剂及作为其原料的生药等中含有多种抗菌性物质，因此利用特定的灭活剂将所述抗菌性物质有效地灭活是极其困难的。例如，已知有为了灭活抗菌性物质而在培养基中添加卵磷脂和聚山梨醇酯的方法，然而虽然相对于对羟基苯甲酸酯类、汞等防腐剂的灭活可获得高的效果，但对于中药提取物制剂的灭活，大多无法获得充分的效果。实际上，在作为中药原料的生药中含有从低分子到高分子的多种化合物，并且，这些化合物大多从分子结构方面看是特征性的成分(萜类化合物、生物碱、黄酮类化合物、醌类、氨基酸、脂肪酸、糖类等)，且含有许多抗菌性物质(萜类化合物、生物碱、黄酮类化合物、鞣酸类等)。由于中药提取物制剂包含多种生药，因此含有广范围的很多抗菌性物质。进而，中药提取物制剂由于其制法而含有许多不溶性微粒，无法使用用于除去抗菌性物质的通用的膜过滤。另一方面，若提高稀释率或增加培养基的量，则灵敏度降低，因此不能说是应当优先选择的方法。

针对这样的问题，本申请人已经提出了通过在培养基中添加活性炭和酸性白土或活性白土来除去被测试样中的抗菌性物质的方法(专利文献1)。该方法虽然在特定微生物试验中有用，但在利用使用琼脂培养基的琼脂平板混释法(plate-count method)的活菌数试验中，培养基因活性炭而着色，并且培养基的透明度因酸性白土或活性白土而下降，因此难以识别菌落。进而，由于不易将这些物质分离除去，因此存在难以准确地识别菌落而进行测量的问题。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2008/038625小册子

发明内容

发明要解决的问题

因此，期望开发出一种对含有多种抗菌性物质的中药提取物制剂、生药，在同一试验条件下可适用于特定微生物试验和活菌数试验这两者而通用性高、能够有效地降低被测试样中的抗菌性物质的影响、可高精度地检测对象微生物的微生物检测方法，本发明的课题是提供这样的微生物检测方法。

用于解决问题的方案