[发明专利]工程化苯丙氨酸解氨酶多肽

权利要求书

1.一种具有苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的工程化多肽，所述工程化多肽由具有与参考序列SEQ ID NO:4至少97％的序列同一性的氨基酸序列组成并且所述工程化多肽与SEQ IDNO:4相比的氨基酸残基差异选自H307G/Q/M或H307G与以下置换中的一个或更多个的组合：A39V、T54K、G59R、S73K、A112C、R134Q、A91V、Q240R/W、A256G、N290G、Y304H、R305M、E308Q、L349M、D353A/N、S399N、P404A、L407V、T460G、E509L、Q521K、K522Y、T524S、P528L、S546R和P564G/L/M；并且所述工程化多肽与所述参考序列SEQ ID NO:4相比表现出选自以下的改进的特性：i)增强的催化活性、ii)降低的对蛋白水解的敏感性、iii)增加的对酸性pH的耐受性、iv)降低的免疫原性、或i)、ii)、iii)和iv)的任何组合。

2.如权利要求1所述的工程化多肽，其中所述氨基酸残基差异是H307G和选自以下的一个或更多个置换的组合：A39V、A91V、Q240R/W、A256G、N290G、Y304H、R305M、D353A/N、S399N、P404A、L407V、Q521K、K522Y/和T524S。

3.如权利要求1所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽与SEQ ID NO:4相比的氨基酸残基差异是H307G/Q/M。

4.如前述权利要求中任一项所述的工程化多肽，其中所述改进的特性选自降低的对蛋白水解的敏感性和/或增加的对酸性pH的耐受性。

5.如权利要求1-3中任一项所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽是多变鱼腥藻酶的变体。

6.如权利要求1-3中任一项所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽耐受蛋白水解。

7.如权利要求6所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽耐受通过至少一种消化道酶的蛋白水解。

8.如权利要求7所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽耐受通过胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、羧肽酶和/或弹性蛋白酶的蛋白水解。

9.如权利要求1-3中任一项所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽是酸稳定的。

10.如权利要求1-3中任一项所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽被去免疫化。

11.如权利要求10所述的工程化多肽，其中所述多肽具有与SEQ ID NO:8、10、12、14、16、18、20、22、24和/或26至少95％的序列同一性。

12.如权利要求1-3中任一项所述的工程化多肽，其中所述多肽是纯化的。

13.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码至少一种如前述权利要求1-12中任一项所述的工程化多肽。

14.如权利要求13所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被可操作地连接到控制序列。

15.如权利要求13或14所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是密码子优化的。

16.一种表达载体，所述表达载体包含至少一种如权利要求13-15中任一项所述的多核苷酸，和至少一种控制序列。

17.如权利要求16所述的表达载体，其中所述控制序列是启动子。

18.如权利要求17所述的表达载体，其中所述启动子是异源启动子。