[发明专利]生产OMEGA-羟基化的脂肪酸衍生物的方法

权利要求书

1.在由可再生的供料得到的碳源存在下，在发酵液中生长时，用于在 体内生产ω-羟基脂肪酸衍生物的重组微生物有机体，所述微生物有机体 包含经改造而表达编码如下多肽的至少2种核酸序列的途径，所述多肽包 括：

(a)EC3.1.2.-、3.1.1.5或3.1.2.14的硫酯酶；或者EC2.3.1.75或EC 2.3.1.20的酯合酶；以及

(b)EC1.14.15.3的经修饰的ω-羟化酶。

2.权利要求1所述的重组微生物有机体，其中所述经修饰的ω-羟化酶 具有经修饰的细胞色素P450单加氧酶的酶活性，并且在体内有效地催化 碳氢化合物链的ω位置。

3.权利要求2所述的重组微生物有机体，其中所述经修饰的ω-羟化酶 为CYP153A-还原酶杂交融合多肽。

4.权利要求3所述的重组微生物有机体，其中所述CYP153A-还原酶 杂交融合多肽为自给自足的CYP153A-RedRhF杂交融合蛋白质。

5.权利要求1所述的重组微生物有机体，其中所述经修饰的ω-羟化酶 为EC1.14.15.3的ω-羟化酶杂交融合蛋白质变体。

6.权利要求5所述的重组微生物有机体，其中所述ω-羟化酶杂交融合 蛋白质变体与SEQIDNO:6具有至少90％的序列一致性，并且具有选自 V141I、V141T、V141Q、V141G、V141M、V141L、R27L、R82D、R178N、 A231T、N309R、N407A、V415R、T516V、P666A、P666D和A796V中 的一个或多个突变。

7.权利要求1所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机体 生产选自ω-羟基脂肪酸和ω-羟基脂肪酸甲基酯中的ω-羟基脂肪酸衍生 物。

8.权利要求1所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机体 经改造而进一步表达编码如下多肽的核酸序列，所述多肽包括EC 1.1.1.1/2的醇脱氢酶，或者EC1.1.3.13或EC1.1.3.20的醇氧化酶。

9.权利要求8所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机体 生产选自ω-氧代脂肪酸和ω-氧代脂肪酸甲基酯中的ω-羟基脂肪酸衍生 物。

10.权利要求8所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机 体经改造而进一步编码如下多肽的核酸序列，所述多肽包括EC1.2.1.3/4/5 的醛脱氢酶或者EC1.2.3.1的醛氧化酶。

11.权利要求10所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机 体生产ω-羟基脂肪酸衍生物，该ω-羟基脂肪酸衍生物为α,ω-二酸或ω-羧 基脂肪酸甲基酯。

12.权利要求10所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机 体经改造而进一步表达编码如下多肽的核酸序列，所述多肽包括EC 6.2.1.3的酰基-CoA连接酶或者EC2.8.3.6酰基-CoA转移酶。

13.权利要求12所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机 体生产ω-羟基脂肪酸衍生物，该ω-羟基脂肪酸衍生物为α,ω-二酯。

14.权利要求8所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机 体经改造而进一步表达编码如下多肽的核酸序列，所述多肽包括EC2.6.1 的氨基转移酶或者EC1.4.9、EC1.4.98或EC1.4.99的胺脱氢酶。

15.权利要求14所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机 体生产ω-羟基脂肪酸衍生物，该ω-羟基脂肪酸衍生物选自ω-氨基脂肪酸 和ω-氨基脂肪酸甲基酯。

16.权利要求1所述的重组微生物有机体，其中所述重组微生物有机 体经改造而进一步表达编码如下多肽的核酸序列，所述多肽包括EC1.1.-.- 的醇脱氢酶以及1.2.99的羧酸还原酶。