[发明专利]组入有水凝胶的层叠细胞膜片

说明书

技术领域

本发明涉及组入有水凝胶、优选组入有明胶水凝胶，或更优选组入有明胶水凝胶粒子的层叠细胞膜片及其制作方法。

背景技术

近年来，作为对因疾病或受伤所致的细胞内组织缺损补充细胞的医疗方法，正在研究使用细胞膜片的细胞移植疗法。特别是，正在研究心肌细胞置换疗法，因为成人的心肌细胞很少增殖，从而由缺血性的心疾病等导致的心肌细胞的缺失成为不可挽回的损伤。

从而，提出了使用由心肌细胞制作的心肌细胞膜片。为了使这样的再生疗法成功，心血管细胞片段的充分定植是必不可少的。进而，正在研究作为用于上述目的的心肌细胞，使用由胚胎干细胞(ESC)或诱导多能干细胞(iPSC)衍生的心脏细胞分段(NPL 1、2和PTL 1)的方法。

确认了通过移植由这些细胞制作的3层的心脏组织膜片，可抑制大鼠的心肌梗塞后的心脏功能降低。然而，该降低并非由诱导心肌细胞的直接影响导致，而是由因间接性旁分泌效应(包含利用细胞所释放的细胞因子的血管再生)而产生的左心室重构的抑制而导致(NPL 3)。

因此，为了将心肌细胞膜片定植在心肌层上，则必须给与更多的心肌细胞，从而始终期望含有大量心肌细胞的更厚的膜片。然而，确认到移植没有血管的4层以上的心肌细胞膜片时，在氧和养分的供给范围外的细胞无法生存，因此定植的细胞数不会改变。从而，认为需要进一步的技术开发以制作在细胞置换疗法中有效的心肌细胞膜片。

明胶水凝胶是可生物降解的生物材料，可以用作细胞培养基质或支架，并且报告有通过在培养细胞凝集体中的含有该凝胶的粒子，可改善例如氧供给等，并从而改善细胞的状态(NPL 4和PTL 2)。

使用明胶水凝胶来制作移植用细胞膜片的公知的方法包含对膜片贴附明 胶水凝胶以使细胞膜片容易从细胞培养基质脱离的方法(PTL 3、4和5)。

引用文献目录

专利文献

PTL 1:国际公开2009/118928号

PTL 2:国际公开2011/059112号

PTL 3:日本未经审查的专利申请公开2011-224398号

PTL 4:日本未经审查的专利申请公开2013-198437号

PTL 5:日本未经审查的专利申请公开2014-75979号

非专利文献

NPL 1:Yamashita J等人，Nature，408:92-6，2000

NPL 2:Yamashita JK等人，FASEB J.，19:1534-6，2005

NPL 3:Masumoto H等人，Stem Cells，30:1196-205，2012

NPL 4:Hayashi K,Tabata Y.，Acta Biomater，7:2797-803，2011

发明内容

技术问题

本发明的目的涉及组入有水凝胶、优选组入有水凝胶粒子、或更优选组入有明胶水凝胶粒子的层叠细胞膜片，或包含该膜片的医药组合物，以及使用水凝胶、优选使用水凝胶粒子、或更优选使用明胶水凝胶粒子来层叠细胞膜片的方法。

本发明的目标是通过层叠细胞膜片来防止细胞膜片中的活细胞数减少以及随之产生的细胞功能的降低。

本发明人等发现，通过使用特定类型的水凝胶材料将细胞膜片层叠，细胞膜片中的活细胞数明显地增加，以致实现上述目标，所述水凝胶材料优选为明胶水凝胶、更优选为明胶水凝胶粒子。此外，确认到通过该方法，细胞可在5层以上的层叠膜片中生存，并且该膜片的功能得到改善。

基于如上所述的结果，本发明人等通过使用明胶水凝胶粒子成功地层叠了细胞膜片，并完成了本发明。

从而，本发明包含下述特征:

[1]一种方法，是层叠细胞膜片的方法，包含使用水凝胶来层叠细胞膜片；

[2]根据[1]所述的方法，其中，由能够使细胞生存所需要的物质扩散的材料制成所述水凝胶或所述水凝胶为能够使细胞生存所需要的物质扩散的形式；

[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中，所述水凝胶为明胶水凝胶；

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的方法，其中，所述水凝胶为水凝胶粒子；

[5]根据[4]所述的方法，其中，所述水凝胶的凝胶粒子为明胶水凝胶粒子；

[6]根据[5]所述的方法，其中，所述明胶水凝胶的凝胶粒子是在明胶分子之间具有分子间交联的明胶水凝胶粒子；