[发明专利]神经损伤治疗用移植材料的制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用牙髓干细胞而制造神经损伤治疗用移植材料的方法等。

背景技术

脊髓是末梢组织与脑之间传导运动、知觉信息的通路，如果受到损伤，则会导致运动麻痹或知觉障碍等严重的肢体障碍。不仅是有效的治疗方法，就连部分功能重建都非常困难。近年来，其研究在世界上积极开展着，但至今仍未研发出治疗的根本方法。

我国(日本)约有10万人脊髓损伤患者，每年新增的损伤患者达5000人左右。集中在20岁前后和60岁前后，主要是壮年层为中心，在驾车或运动中因事故而受到损伤、或老年人因受到轻微撞击而脊椎骨折等引起。一旦失去的身体功能难以恢复，患者从那以后生活会受到很多限制。

近年来，有研究指出移植人牙髓干细胞，显著恢复伴随大鼠脊髓损伤的运动障碍(非专利文献1)，但是要求重复再现性更好、能够获得高恢复效果的神经损伤的治疗方法。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：SakaiK.等人,JClinInvest122:80-90

发明内容

技术问题

本发明的目的在于提供对于因神经损伤而引起的功能障碍具有高恢复效果的移植材料的、有效且重复再现性良好的制造方法。

技术方案

本发明的发明者们为了解决上述课题做了反复研究，其结果确认出如果在现有的培养基中以较高浓度加入FGF2，培养牙髓干细胞，将培养物移植于脊髓损伤模型，则与现有的方法比较，运动功能的恢复效果得到显著提高，进一步地，如果使用表现出特定的基因表达模式的牙髓干细胞，则能够获得再现性良好的恢复效果，由此完成了本发明。

即，本发明涉及以下[1]～[27]。

[1]一种神经损伤治疗用移植材料的制造方法，该方法包括步骤：在实质不含碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)以外的生长因子的培养基中，培养牙髓干细胞。

[2]如上述[1]所述的方法，所述实质不含碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)以外的生长因子的培养基，是在含有血清的基本培养基中，作为生长因子只添加碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)的培养基。

[3]如上述[2]所述的方法，所述培养基中的血清浓度小于15重量％。

[4]如上述[1]所述的方法，所述实质不含碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)以外的生长因子的培养基，是在作为培养间充质干细胞的培养基而市售的培养基中，作为生长因子仅添加碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)的培养基。

[5]如上述[1]至[4]中任意一项所述的方法，所述培养基中的FGF2浓度为5ng/ml以上。

[6]如上述[5]所述的方法，所述培养基中的FGF2浓度为7ng/ml以上。

[7]如上述[1]至[6]中任意一项所述的方法，作为所述牙髓干细胞而使用以下细胞：与牙髓干细胞的基因的表达量的平均比较，表1的基因群中10％以上的种类的基因表达量高5倍以上的牙髓干细胞。

[8]如上述[1]至[7]中任意一项所述的方法，作为所述牙髓干细胞而使用以下细胞：与牙髓干细胞的基因的表达量的平均比较，从由MYO1G、RBMY2FP、FILIP1、C1orf64、TNFRSF8、C2orf48、AGTR1、Dydc2、Znf708、Dct、Slc15a1、Zhddc22、Adam20、Gnao1、Csn2、Semg2、Dnah1、Ctag1a、Lrrc19、Lipg以及Cbln2构成的群中选择的至少一种基因的表达量高5倍以上的牙髓干细胞。

[9]如上述[1]至[8]中任意一项所述的方法，作为所述牙髓干细胞而使用以下细胞：与牙髓干细胞的基因的表达量的平均比较，表2的基因群中10％以上的种类的基因表达量低5倍以上的牙髓干细胞。

[10]如上述[1]至[9]中任意一项所述的方法，作为所述牙髓干细胞而使用以下细胞：与牙髓干细胞的基因的表达量的平均比较，从由Gafa3、Lmf1、Fam13a、Gkn1、Gpr112、Sult1c4、Slc35f4、Gstt1、Gpr27、Pdia2、RIIAD1、GSTT1、SLC2A2以及HTATSF1P2构成的群中选择的至少一种基因的表达量低5倍以上的牙髓干细胞。

[11]如上述[1]至[6]中任意一项所述的方法，作为所述牙髓干细胞，从两种以上的牙髓干细胞的细胞群中选择使用以下细胞群：表1的基因群中10％以上的种类的基因表达量与其他细胞群比较高5倍以上的牙髓干细胞的细胞群。