[发明专利]双特异性Fc分子

说明书

相关专利申请的交叉引用

本专利申请要求于2013年3月15日提交的美国临时专利申请61/791,424的权益，该申请以引用的方式全文并入本文。

技术领域

本发明属于蛋白质工程领域。

背景技术

双特异性抗体有希望作为多种适应症的治疗剂。由于具有标准IgG形式的双特异性抗体包含四个不同的多肽链，因此该种抗体的生产可能是具有挑战性的。一种较小且更易生产的双特异性分子的功效已经在非霍奇金淋巴瘤中得到临床证明。参见，例如，Bargou等.(2008),Science321(5891):974-977。由于这种小单链分子的体内半衰期短，因此，采用通过连续静脉输注的长时间给药来得到上述结果。Id.因此，本领域需要保留类似治疗功效的双特异性治疗剂，该治疗剂能直接被生产并具有有利的药物动力学性质，包括更长的半衰期。

发明内容

本文所述双特异性Fc(Bi-Fc)能结合至两种不同的蛋白质，并且Bi-Fc包含抗体的Fc区或其一部分。相对于不含Fc区的双特异性单链分子，Bi-Fc可具有有利的药代动力学性质。一种由Bi-Fc结合的蛋白质能在免疫效应细胞如T细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞或巨噬细胞上表达，另一种蛋白质能在靶细胞上表达，所述靶细胞例如癌细胞、病原体感染的细胞或介导疾病的细胞，如引起纤维化的成纤维细胞。本文所述Bi-Fc分子在靶细胞存在下能引起免疫效应细胞的活化，和/或在免疫效应细胞存在下杀死靶细胞。

一方面，本文提供一种Bi-Fc，所述Bi-Fc可包含：(a)(i)具有式V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fc的第一多肽链，其中Fc为Fc多肽链，其中V1、V2、V3和V4各自为具有不同氨基酸序列的免疫球蛋白可变区，其中L1、L2、L3和L4为连接子，并且其中L2和/或L4可以存在或缺失，和(ii)包含Fc多肽链的第二多肽链；或(b)(i)具有式Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4的第一多肽链，其中Fc是Fc多肽链，其中V1、V2、V3和V4各自为具有不同氨基酸序列的免疫球蛋白可变区，其中L1、L2、L3和L4为连接子，并且其中L2和/或L4可以存在或缺失，和(ii)包含Fc多肽链的第二多肽链；其中所述Bi-Fc通过免疫效应细胞介导显示靶细胞蛋白的靶细胞的细胞裂解，而不通过免疫效应细胞介导不显示靶细胞蛋白的细胞的细胞裂解，和/或其中Bi-Fc能结合至靶细胞和免疫效应细胞。第一和第二多肽链中的Fc多肽链可以是人IgGFc多肽链。V1可以是重链可变区(VH)，V2可以是轻链可变区(VL)。在一个可选的实施方案中，V1可以是VL区且V2可以是VH区。V3和V4可以分别是VH区和VL区，或V3和V4可以分别是VL区和VH区。L1和L3可以为至少15个氨基酸长，且若L2存在，则其可以小于12个氨基酸长。当V1和V2为IgG和/或scFv抗体的一部分时，它们能结合至靶细胞或免疫效应细胞，且当V3和V4为IgG和/或scFv抗体的一部分时，它们能结合至靶细胞或免疫效应细胞。第一多肽链中的Fc多肽链可包含异源二聚化改变，且第二多肽链中的Fc多肽链可包含另一个异源二聚化改变。所述第一多肽链中的异源二聚化改变可以是电荷对置换，且第二多肽链中的异源二聚化改变可以是电荷对置换。第一多肽链可包含电荷对置换R409D、R409E、K409D或K409E和N392D、N392E、K392D或K392E，且第二多肽链可包含电荷对置换D399K或D399R和E356K、E356R、D356K或D356R；或第二多肽链可包含电荷对置换R409D、R409E、K409D或K409E和N392D、N392E、K392D或K392E，且第一多肽链可包含电荷对置换D399K或D399R和E356K、E356R、D356K或D356R。第一和第二多肽链中的Fc多肽链可以是人IgGFc多肽链，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc多肽链。第一和第二多肽链的Fc多肽链可包含一个或多个抑制Fcγ受体(FcγR)结合或增强ADCC的改变。第一和第二多肽链的Fc多肽链包含，例如，L234A、L235A和在N297处的任意置换。