[发明专利]使用拼装序列扩增片段化的目标核酸的方法

权利要求书

1.一扩增含有短目标核酸片段的一片段化的目标核酸的方法，所述方法包括步骤：

A.混合所述片段化的目标核酸和一拼装序列，其中所述拼装序列与所述片段化的目标核酸互补，所述拼装序列与所述片段化的目标核酸来源于相同的遗传物种并且高度相关；

B.所述短目标核酸片段退火与所述拼装序列结合，通过聚合酶所述短目标核酸片段在3’端方向延伸以产生一群含有一群第一核酸和所述拼装序列的第一双重核酸；

C.从所述一群第一核酸解离所述拼装序列；

D.一引物退火与所述一群第一核酸结合，其中所述引物与所述拼装序列相同，且位于相对于相结合的核酸片段的3’端方向的所关注的检测区域，用聚合酶在所述3’端方向延伸所述引物以产生一群含有一群第二核酸和所述一群第一核酸的第二双重核酸；

E.分离所述的所述第一和所述第二核酸群；

F.退火所述第一群和所述第二群核酸使其相互结合和与所述拼装序列结合，在3’端方向延伸所述一群第一核酸和所述一群第二核酸；且

G.重复步骤E和F，从而扩增所述片段化的目标核酸。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述拼装序列是一野生型拼装序列。

3.一扩增和检测含有与短目标核酸片段的一片段化的目标核酸的方法，所述方法包括步骤：

A.在一含有短目标核酸片段和一拼装序列的混合物中所述短目标核酸片段退火与所述拼装序列结合，其中所述拼装序列与所述片段化的目标核酸互补，通过聚合酶在所述3’端方向延伸所述短目标核酸片段以产生一群含有一群第一核酸和所述拼装序列的第一双重核酸，任选地从所述拼装序列解离所述一群第一核酸；

B.一引物退火与所述一群第一核酸结合，其中所述引物与所述拼装序列相同，且位于相对于相结合的核酸片段的3’端方向的所关注的检测区域，用聚合酶在所述3’端方向延伸所述引物以产生一群含有一群第二核酸和所述一群第一核酸的第二双重核酸；

C.退火所述第一群和所述第二群核酸使其相互结合和与所述拼装序列结合，在3’端方向延伸所述一群第一核酸和所述一群第二核酸；且

D.重复步骤B和C，从而扩增所述片段化的目标核酸；且

E.使用一能够检测低至单核苷酸水平的遗传变异的试验检测所述扩增的目标核酸。