[发明专利]含有非糖基化Fc的多肽

说明书

本文提供了效应子功能缺少或高度降低但在N297处缺少糖基化时仍具高稳定性的变体人IgG1 Fe分子。此外，本文提供在哺乳动物细胞中表达时被糖基化的接头肽。IL‑2结合三种跨膜受体亚单位：IL‑2R‑和IL‑2Ry，两者在IL‑2结合时一起活化细胞内信号传导事件；以及CD25(IL‑2Ra)，其用来稳定IL‑2和IL‑2RBY之间的相互作用。IL‑2RBY递送的信号包括PI3‑激酶、Ras‑MAP‑激酶和STAT5途径的那些信号。

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年3月14日提交的美国临时申请序列第61/784,669号的权益。上述申请以引用方式并入本文中。

序列表的引用

本申请随电子格式的序列表一起提交。序列表以文本文件提供，名称为A-1892-WO-PCT_ST25.txt，创建于2014年3月13日，大小为57,344个字节。电子格式序列表中的信息据此全部以引用方式并入本文。

背景

IL-2结合三种跨膜受体亚单位：IL-2Rβ和IL-2Rγ，两者在IL-2结合时一起活化细胞内信号传导事件；以及CD25(IL-2Rα)，其用来稳定IL-2和IL-2Rβγ之间的相互作用。IL-2Rβγ递送的信号包括PI3激酶、Ras-MAP激酶和STAT5途径的那些信号。

T细胞需要表达CD25来响应通常存在于组织中的低浓度IL-2。表达CD25的T细胞包括抑制自体免疫炎症所必需的FOXP3+调节T细胞(Treg细胞)以及被活化来表达CD25的FOXP3-T细胞两者。FOXP3-CD25+T效应细胞(Teff)可为CD4+或CD8+细胞，两者均可促成炎症、自体免疫、器官移植排斥或移植物抗宿主疾病。IL-2刺激的STAT5信号传导对于正常T-reg细胞的生长和存活以及FOXP3高表达至关重要。

在共同拥有的WO 2010/085495中，我们描述了用IL-2突变蛋白来优先扩增或者刺激Treg细胞。当施用给受试者时，Treg细胞的效应可用于治疗炎性疾病和自体免疫疾病。尽管其中所述的IL-2突变蛋白可用于在体内相比于Treg细胞优先扩增Teff细胞，但期望产生对人治疗剂而言具有最佳属性的IL-2突变蛋白。

概述

本文描述的是IL-2突变蛋白，其适于高产率生产性并具有优化的药理学活性。在尝试生产示例性IL-2突变蛋白基人治疗剂的过程中，出现多个出乎意料且不可预见的观察结果。本文所述的IL-2突变蛋白是所述尝试的结果。

本文所述的IL-2突变蛋白对IL-2具有最小数量的改变，从而减少了产生抗IL-2突变蛋白和/或内源性IL-2的免疫应答的可能性，但仍维持Treg的优先扩增和活化。此外，在某些实施方案中，当施用给受试者时，IL-2突变蛋白与增加血清半衰期的分子(例如抗体Fc)融合。IL-2突变蛋白具有短的血清半衰期(对于皮下注射为3至5小时)。本文所述的示例性IL-2突变蛋白Fc融合物在人体内的半衰期为至少1天、至少3天、至少5天、至少10天、至少15天、至少20天或至少25天。对IL-2突变蛋白的药代动力学的这种效应允许IL-2突变蛋白治疗剂可以降低或较低的频率给药。

此外，在产生药物大分子时，必须考虑大量产生大分子的能力，使聚集最小化并且使分子的稳定性最大化。IL-2突变蛋白Fc融合分子展示出此类属性。

另外，在某些实施方案中，IL-2突变蛋白Fc融合蛋白含有IgG1Fc区。当期望消除IgG1(例如ADCC活性)的效应子功能时，发现297位处天冬酰胺向甘氨酸的突变(N297G；EU编号方案)与导致非糖基化IgG1的其它突变相比可提供极大改善的纯化效率以及生物物理特性。在优选的实施方案中，将半胱氨酸工程改造到Fc中以允许存在二硫键，这增加了含有非糖基化Fc分子的稳定性。非糖基化Fc的有效性超过IL-2突变蛋白Fc融合范围。因此，本文提供了含有Fc的分子、Fc融合物和抗体，其包含N297G取代以及一个或多个额外残基对半胱氨酸的任选取代。