[发明专利]具有抗半翅目活性的杀昆虫蛋白及其使用方法

权利要求书

1.一种分离的三结构域杀昆虫蛋白，其具有保守的气溶素型三结构域结构，其包含：

a.结构域I，包含a)包含与SEQ ID NO:2的Phe26、Val48、Pro50、Ile52、Tyr56、Met193、Val202、His205、Tyr206、Phe207、Trp208、Phe209和Leu210对应的氨基酸残基的表面疏水补丁和b)包含如由SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列基序的1’型β转角；

b.结构域II；以及

c.结构域III，其中所述结构域II和结构域III的表面包含暴露于溶剂中的丝氨酸和苏氨酸残基条带，其包含气溶素型三结构域结构的链11上交替基序中3个丝氨酸残基和4个苏氨酸残基，以及链7上的3个丝氨酸残基和2个苏氨酸残基。

2.根据权利要求1所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中结构域I还包含具有四个短链的反向平行β折叠和四个α螺旋，称之为螺旋1、螺旋2、螺旋3和螺旋4。

3.根据权利要求2所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中结构域I的所述反向平行的β折叠还包括链11、链12的C端，以及链11和链12的所述1'型β转角连接。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中结构域I还包含螺旋2和螺旋3之间的β发夹。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述表面疏水补丁包含链12、螺旋2、螺旋3的所述残基，并且所述1'型β转角包含链11和链12之间的残基。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述表面疏水补丁为约

7.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中结构域II包含5条链构成的反向平行β折叠(β5/β6-β11-β13-β7-β10)，通过源于β2和β10的两亲性β发夹补于一侧。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述三结构域杀昆虫蛋白与SEQ ID NO:2的多肽相比，溶血活性有所降低。

9.根据权利要求8所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述溶血活性与SEQ ID NO:2的所述多肽的所述溶血活性相比，降低了至少1/2。

10.根据权利要求8所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述溶血活性的降低是所述疏水补丁中一个或多个氨基酸残基置换的结果。

11.根据权利要求10所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述疏水补丁中的所述残基选自与SEQ ID NO:2的Phe26、Val48、Pro50、Ile52、Tyr56、Met193、Val202、His205、Tyr206、Phe207、Trp208、Phe209和Leu210对应的残基。

12.根据权利要求8所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述疏水补丁包含如由SEQ ID NO:26的序列表示的基序，其中在对应于SEQ ID NO:2的位置206、207、208或209的残基处，至少一个残基为与所述野生型氨基酸不同的氨基酸。

13.根据权利要求8所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述疏水补丁包含如由SEQ ID NO:27的序列表示的基序，其中在对应于SEQ ID NO:2的位置206、207、208或209的残基处，至少一个残基为与所述野生型氨基酸不同的氨基酸。

14.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的三结构域杀昆虫蛋白，其中所述三结构域杀昆虫蛋白与SEQ ID NO:2具有至少95％的氨基酸序列同一性。

15.一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码根据权利要求1至14中任一项所述的三结构域杀昆虫蛋白。

16.一种DNA构建体，所述DNA构建体包含根据权利要求15所述的核酸分子。

17.一种非人宿主细胞，所述非人宿主细胞包含根据权利要求16所述的DNA构建体。

18.根据权利要求17所述的非人宿主细胞，其中所述宿主细胞为植物细胞。