[发明专利]成人干细胞的体外扩增

权利要求书

1.一种产生条件性无限增殖化成人造血干细胞群体的方法，所述方法包括：

向一种或多种成人造血干细胞提供：

a)外源合成的能促进细胞存活或增殖中的一者或多者的Myc融合多肽，其中所述Myc融合多肽以1μg/ml至50μg/ml的浓度提供；和

b)外源合成的能抑制凋亡的Bcl-2结构域多肽，其中所述Bcl-2结构域多肽以1μg/ml至50μg/ml的浓度提供；并且

其中所述Myc融合多肽以至少24小时的时间间隔提供给所述一种或多种成人造血干细胞；并且其中所述Myc融合多肽连续提供给所述细胞至少24小时；

其中所述Bcl-2结构域多肽以至少24小时的时间间隔提供给所述一种或多种成人造血干细胞，以产生条件性无限增殖化成人造血干细胞群体；以及其中所述Myc融合多肽包括融合至蛋白转导结构域的Myc多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述Myc融合多肽以至少72小时的时间间隔提供；以及所述Bcl-2结构域多肽以至少72小时的时间间隔提供。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述Myc融合多肽的所述Myc多肽是n-Myc、c-Myc、l-Myc、v-Myc或s-Myc中的一者或多者。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述Bcl-2结构域多肽包括BH1、BH2、BH3和BH4。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种Bcl-2结构域多肽是Bcl-2、Bcl-w、Bcl-X、Bel-XL、Mcl-1中的一者或多者。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种Bcl-2结构域多肽是Bcl-2。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述Bcl-2多肽包含选自由Tat、EPTD和vpr组成的群组的蛋白转导结构域。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白转导结构域是Tat。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白转导结构域是EPTD。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白转导结构域是vpr。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种成人造血干细胞在包含IL3、IL6和干细胞因子的培养基中培养。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种成人造血干细胞在包含IL3、IL6、干细胞因子、促血小板生成素和Flt3-L及GM-CSF的培养基中培养。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种成人造血干细胞的扩增情况为以下一种或多种情况：在28天里扩增270倍、在14天里扩增150倍、在21天里扩增100倍或者在9至14天里扩增85倍。

14.根据权利要求1所述的方法，其中在8小时时间里提供不超过1μg/ml的Myc融合多肽。

15.根据权利要求1所述的方法，其中产生所述群体是在透气容器内进行。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述Myc融合多肽以至少96小时的时间间隔提供；以及所述Bcl-2结构域多肽以至少96小时的时间间隔提供。

17.根据权利要求1所述的方法，其中所述Myc融合蛋白在提供到一种或多种成人造血干细胞后48小时里在细胞中是可检测的。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述Myc融合多肽以至少48小时的时间间隔提供；以及所述Bcl-2结构域多肽以至少48小时的时间间隔提供。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述Myc多肽是c-Myc以及所述蛋白转导结构域是Tat。