[发明专利]针对间质和上皮-间质转化的循环肿瘤细胞的特异性检测工具

说明书

本发明包括发现细胞表面波形蛋白作为从癌症患者的血液检测和分离间质和上皮‑间质转化的循环肿瘤细胞的新颖生物标志物。此外，提供一种对循环肿瘤细胞上的细胞表面波形蛋白的检测具有特异性的抗体以及所述抗体检测、计数和分离CTC的用途。

本申请要求2013年3月5日提交的美国临时申请号61/772,973的优先权权益，所述美国临时申请的整个内容以引用的方式并入本文。

文件名称“UTFCP1208WO_ST25.txt”中包含的3KB(如Microsoft Windows中所测量)且于2014年2月18日创建的序列表通过电子提交与此一起提交，并且以引用的方式并入本文。

发明背景

本发明根据由国立卫生研究院授予的资助号CA120295在政府资助下进行。政府享有本发明的某些权利。

1.发明领域

本发明大体上涉及癌症生物学的领域。更具体来说，它涉及计数和分离循环肿瘤细胞以有助于早期检测肿瘤、转移和复发。

2.相关技术的描述

转移是癌症相关死亡的主要原因。循环肿瘤细胞(CTC)被视为转移的种子，并且被定义为使它们自身从原发性肿瘤脱离进入血流中，并且朝向远端器官行进以定殖成转移瘤的罕见细胞(Pantel和Brakenh off,2004)。尽管在癌症疗法领域的近期进步能够牵制原发性癌症散布，但需要用于早期检测、诊断和治疗性监测转移性癌症的可靠生物标志物。癌症患者的外周血液中存在的CTC正作为用于早期检测和监测抗癌药物的治疗功效的有前途靶标而出现(Parkinson等,2012)。目前，用于检测CTC的可接受标志物包括EpCAM和细胞角蛋白(Parkinson等,2012)。然而，这些标志物可检测仅上皮CTC，从而排除已丧失EpCAM的表达的上皮-间质转化的(EMT)CTC(Sieuwerts等,2009)和源于间质肿瘤的任何其它非上皮CTC，所述间质肿瘤构成成人癌症类型的约10％以及儿科癌症类型的约20％(Mackall等,2002)。当前检测工具的这个局限性表明急切需要可满足这些要求的新颖工具。

发明概述

在一些实施方案中，本发明提供一种用于检测循环肿瘤细胞上的细胞表面波形蛋白的新颖抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体特异性结合波形蛋白多肽，并且其中所述抗体与84-1单克隆抗体竞争结合所述多肽。在某些方面，本发明的单克隆抗体可与84-1单克隆抗体结合相同表位。

在一个方面，本发明的单克隆抗体可包含与84-1的V_H CDR1(SEQ ID NO:3)至少80％同一的第一V_H CDR；与84-1的V_H CDR2(SEQ ID NO:4)至少80％同一的第二V_H CDR；与84-1的V_H CDR3(SEQ ID NO:5)至少80％同一的第三V_H CDR；与84-1的V_L CDR1(SEQ ID NO:6)至少80％同一的第一V_L CDR；与84-1的V_L CDR2(SEQ ID NO:7)至少80％同一的第二V_LCDR；和与84-1的V_L CDR3(SEQ ID NO:8)至少80％同一的第三V_L CDR。

在另一方面，本发明的单克隆抗体可包括与SEQ ID NO:3同一的第一V_H CDR；与SEQ ID NO:4同一的第二V_H CDR；与SEQ ID NO:5同一的第三V_H CDR；与SEQ ID NO:6同一的第一V_L CDR；与SEQ ID NO:7同一的第二V_L CDR；和与SEQ ID NO:8同一的第三V_L CDR。