[发明专利]复合物

说明书

本发明涉及血管性血友病因子(VWF)与因子VIII的共价复合物，其中所述复合物经修饰而具有延长的体内半衰期。本发明进一步涉及生产所述复合物的方法，以及该复合物用于治疗或预防出血事件的治疗性或预防性用途。

本发明涉及血管性血友病因子或其变体(VWF)与因子VIII或其变体(因子VIII)的共价复合物，其中所述复合物经修饰而具有延长的体内半衰期。本发明进一步涉及生产所述复合物的方法，以及该复合物用于治疗或预防出血事件的治疗性或预防性用途。

血液凝集因子缺乏可引起多种出血障碍。最常见的障碍包括A型和B型血友病，其分别由血液凝集因子VIII和因子IX的缺乏造成。血管性血友病则是另一种已知的出血障碍。

在血浆中，因子VIII(FVIII)大多以与血管性血友病因子的以非共价复合物的形式存在。原肽切割后形成的成熟FVIII为由多达2332个氨基酸构成的多肽，其由若干结构域组成，如图1中所示。FVIII在凝血中的功能为加速因子IXa依赖的X因子向Xa因子的转化。由于FVIII和血管性血友病因子形成复合物，所以长期以来人们认为FVIII和血管性血友病因子的功能是同一分子的两种功能。到了70年代才清楚FVIII和血管性血友病因子是分开的分子，只是在生理条件下形成复合物。80年代，人们确定了FVIII和血管性血友病因子的解离常数为约0.2nmol/L(Leyte等人,Biochem J 1989,257:679-683)，并确定了两个分子的DNA序列。

典型血友病，或称为A型血友病是一种遗传性出血障碍。其由X染色体连锁的血液凝集因子FVIII缺乏导致，几乎只在男性中发生，几率为每10,000人中1-2人。该X染色体缺陷是由自身不是血友病患者的女性携带者递送下来的。A型血友病临床表现为增加的出血倾向。在引入FVIII浓缩物进行治疗前，患有严重血友病的患者平均寿命不到20岁。使用来自血浆的FVIII浓缩物显著改善了A型血友病患者的状况，极大地增加了平均平均寿命，使其中大多数和患者有可能过上差不多正常的生活。然而，源于血浆的浓缩物及其用途存在特定问题，其中最严重的问题为病毒传播，如引起乙型肝炎、非甲非乙型肝炎以及HIV的病毒。然而，近年开发了不同的病毒灭活方法及新型高度纯化的FVIII浓缩物为血浆来源的FVIII建立了非常高的安全标准。

接受预防性FVIII治疗的严重A型血友病患者需要每周静脉(i.v.)施用约三次，这是因为FVIII的血浆半衰期只有约12小时。每次i.v.施用是繁琐的，伴随着疼痛，并具有感染的风险，特别是当由患者自身在家中进行或由被诊断患有A型血友病的患儿父母进行时。

因此，非常需要创造一种具有增加的功能半衰期的FVIII，使得能够制造更低频率施用的含FVIII的药学组合物。

已经做出一些尝试来延长FVIII的功能半衰期，如通过减少其与细胞受体的相互作用(WO 03/093313A2、WO 02/060951A2)，通过将聚合物与FVIII共价连接(WO 94/15625、WO 97/11957和US 4970300)，通过将FVIII胶囊化(WO 99/55306)，通过引入新型金属结合位点(WO 97/03193)，通过用肽键(WO 97/40145和WO 03/087355)或二硫键(WO 02/103024A2)将A2结构域共价连接至A3结构域，或通过引入防止凝血酶活化后在A1和A2结构域间进行切割从而保持A1结构域与A2结构域间的共价连接的突变(WO2006/108590)。

另一种增强FVIII或血管性血友病因子的功能半衰期的方法是将FVIII进行PEG化(WO 2007/126808、WO 2006/053299、WO 2004/075923)或将血管性血友病因子进行PEG化(WO 2006/071801),其中的想法是PEG化的血管性血友病因子具有增加的半衰期，也会间接地增强血浆中存在的FVIII的半衰期。此外，还有人描述了FVIII与半衰期增强多肽如白蛋白或免疫球蛋白Fc的恒定区的融合蛋白(WO 2004/101740、WO2008/077616和WO 2009/156137)。