[发明专利]在有效生产对映体富集的醇中用于酮的对映体选择性还原的设计师细胞及其应用

权利要求书

1.设计师细胞，其在细胞的表面上表达选自序列表的SEQ ID NO:1、3、5或7的序列的非天然出现的羰基还原酶多肽，与在细胞的细胞质中表达序列表的SEQ ID NO:13或15或17或19的相应羰基还原酶的设计师细胞相比，对于式1的4-氯乙酰乙酸乙酯向式2的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的转化，每单位质量的羰基还原酶多肽具有250倍至300倍更高的活性

2.根据权利要求1的所述设计师细胞，其在细胞的表面上表达序列表的SEQ ID NO:1的非天然出现的羰基还原酶多肽，与在细胞的细胞质中表达序列表的SEQ ID NO:13的相应羰基还原酶的设计师细胞相比，对于式3的化合物的还原，每单位质量的羰基还原酶多肽具有50倍至275倍更高的活性

其中R₁＝CH₃、CH₂X、(CH₃)₂CH、CF₃或CH₃(CH₂)_n

R₂＝H、X或CH₃(CH₂)_n；

R₃＝烷基，包含CH₃或CH₃(CH₂)_m；

X＝Cl或Br；

n＝1-4和

m＝1-8。

3.根据权利要求1的所述设计师细胞，其在细胞的表面上表达序列表的SEQ ID NO:1的非天然出现的羰基还原酶多肽，与在细胞的细胞质中表达序列表的SEQ ID NO:13的相应羰基还原酶的设计师细胞相比，对于式4的化合物的还原，每单位质量的羰基还原酶多肽具有50倍至180倍更高的活性

其中R₁＝R₂＝R₃＝R₄＝R₅＝H、CH₃、F、Cl、Br、I、CF₃、NO₂或OCH₃；

R₆＝烷基，包含CH₃或CH₃(CH₂)_n；

n＝1至5。

4.设计师细胞，其在细胞的表面上同时表达选自序列表的SEQ ID NO:1、3、5或7的序列的非天然出现的羰基还原酶多肽和选自序列表的SEQ ID NO:9或11的序列的非天然出现的葡萄糖脱氢酶多肽，与在细胞的细胞质中同时表达序列表的SEQ ID NO:13或15或17或19的相应羰基还原酶和序列表的SEQ ID NO:21或23的相应葡萄糖脱氢酶的设计师细胞相比，对于式1的4-氯乙酰乙酸乙酯向式2的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的转化，每单位质量的羰基还原酶多肽具有250倍至300倍更高的活性，并且对于葡萄糖向葡萄糖酸盐的氧化，每单位质量的葡萄糖脱氢酶多肽具有200倍至250倍增强的活性

5.根据权利要求4的所述设计师细胞，其在细胞的表面上同时表达选自序列表的SEQID NO:1、3、5或7的序列的非天然出现的羰基还原酶多肽和选自序列表的SEQ ID NO:9或11的序列的非天然出现的葡萄糖脱氢酶多肽，与在细胞的细胞质中同时表达序列表的SEQ IDNO:13或15或17或19的相应羰基还原酶和序列表的SEQ ID NO:21或23的相应葡萄糖脱氢酶的设计师细胞相比，对于式1的4-氯乙酰乙酸乙酯向式2的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的转化，每单位细胞质量增强11倍至24倍更高的活性，并且对于葡萄糖向葡萄糖酸盐的氧化，每单位细胞质量具有9倍至31倍增强的活性。