[发明专利]用于配制阴离子试剂的方法

权利要求书

1.一种生产包含阴离子试剂的粒子的方法，所述方法包括：

(a)将(i)在脂质-阴离子试剂粒子形成期间防止粒子聚集的改性脂质与(ii)阳离子脂质以足以形成复合物的量合并在酸性水溶液中；

(b)将步骤(a)的复合物与阴离子试剂合并；

(c)将中性水溶液与步骤(b)的复合物-阴离子试剂合并，以形成复合物-阴离子试剂水性悬液；

(d)形成溶液或悬液，所述溶液或悬液包含选自结构性脂质、甾醇、阳离子脂质和在脂质-阴离子试剂粒子形成期间防止粒子聚集的改性脂质的至少一种脂质；以及

(e)通过选自下列的方法将步骤(d)的溶液或悬液与步骤(c)的复合物-阴离子试剂水溶液合并：向步骤(c)的复合物-阴离子试剂水性悬液加入步骤(d)的溶液或悬液，以及将步骤(d)的溶液或悬液与步骤(c)的复合物-阴离子试剂水溶液在线混合，

由此产生包含阴离子试剂的粒子。

2.权利要求1的方法，其中步骤(a)的所述酸性水溶液包含HCl。

3.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)的所述酸性水溶液具有低于4的pH。

4.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)的所述酸性水溶液具有2.3的pH。

5.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)的所述酸性水溶液是约60mMHCl。

6.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)的所述阳离子脂质包含可质子化基团。

7.权利要求6的方法，其中步骤(a)的所述阳离子脂质具有4至11的pKa。

8.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)的所述阳离子脂质选自DODMA、DOTMA和表1的阳离子脂质。

9.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)或步骤(d)的所述在脂质-阴离子试剂粒子形成期间防止粒子聚集的改性脂质是PEG-脂质。

10.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)或步骤(d)的所述改性脂质选自DMPE-PEG、DSPE-PEG和DSG-PEG。

11.权利要求9或10任一项的方法，其中所述PEG是PEG2k。

12.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(a)的复合物的直径在60至75nM之间。

13.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(b)的所述阴离子试剂是多阴离子试剂。

14.前述权利要求任一项的方法，其中所述阴离子试剂是核酸。

15.权利要求14的方法，其中所述核酸选自反义寡核苷酸和双链核酸。

16.权利要求15的方法，其中所述双链核酸选自小发夹RNA(shRNA)和siRNA。

17.权利要求16的方法，其中所述双链核酸是人类Dicer的底物。

18.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(c)的所述中性水溶液是水。

19.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(d)的所述形成溶液或悬液包括将所述选自结构性脂质、甾醇、阳离子脂质和在脂质-阴离子试剂粒子形成期间防止粒子聚集的改性脂质的至少一种脂质溶解在乙醇中。

20.步骤19的方法，其中步骤(d)的所述形成溶液或悬液包括溶解在100％乙醇中。

21.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(d)的所述结构性脂质选自DSPC、DPPC和DOPC。

22.前述权利要求任一项的方法，其中所述甾醇是胆甾醇。

23.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(d)的所述阳离子脂质选自表1。

24.前述权利要求任一项的方法，其中所述包含阴离子试剂的粒子的直径在90至110nm之间。