[发明专利]新型核酸分子

权利要求书

1.一种DNA构建体，该DNA构建体包含tRNApyl基因，该基因包含tRNApyl编码序列和功能性的基因内RNA聚合酶III启动子元件，所述启动子元件包含推测的A盒、推测的B盒或其组合，其中所述tRNApyl基因能够在真核表达系统中表达足以支持琥珀型抑制的功能性tRNApyl，其中所述tRNApyl基因是选自来源于马氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina mazei)的选自SEQ ID NO:7、8、9、10或11的序列。

2.根据权利要求1所述的DNA构建体，该构建体包含在该tRNApyl编码序列下游的终止子序列。

3.根据权利要求1或2所述的DNA构建体，其中该tRNApyl编码序列可操作地连接至RNA聚合酶III启动子，其中所述启动子置于该tRNApyl编码序列的5’；或者，

其中，该DNA构建体包含基因内启动子元件和5’启动子元件，该5’启动子元件为置于该tRNApyl编码序列5’的RNA聚合酶III启动子元件，这样使得所述基因内启动子元件和所述5’启动子元件的组合构成杂合启动子。

4.如权利要求3所述的DNA构建体，其中该5’启动子元件和该tRNApyl编码序列通过含有转录起始位点的间隔子序列分开。

5.根据权利要求4所述的DNA构建体，其中所述5'启动子元件为4型RNA聚合酶III启动子的5'启动子元件。

6.根据权利要求5所述的DNA构建体，其中4型RNA聚合酶III启动子的该5’启动子元件选自：EBER RNA基因启动子、7SL RNA基因启动子以及穹窿体RNA基因启动子的5’启动子元件；所述5’启动子元件的序列选自：

SEQ ID No12、20、26、57、58、59、60、61、62、63、64以及65。

7.根据权利要求4所述的DNA构建体，其中该间隔子序列选自SEQ ID NO13和21。

8.一种多聚体DNA构建体，该构建体包含多个拷贝的根据权利要求1至7中任一项所述的DNA构建体。

9.根据权利要求8所述的多聚体DNA构建体，其包含2至60个拷贝的根据权利要求1至7中任一项所述的DNA构建体。

10.根据权利要求1或2或8所述的DNA构建体，该构建体还包含PylRS编码序列或基因。

11.一种真核宿主细胞，该细胞用包含根据权利要求1至10中任一项所述的DNA构建体的载体转化，且该细胞用包含编码靶蛋白的基因的载体转化，该靶蛋白含有由琥珀密码子编码的一个或多个非天然氨基酸。

12.一种真核细胞系，该真核细胞系包含权利要求4-10中任一项所述的DNA构建体，其表达功能性PylRS和功能性tRNApyl，其中功能性tRNApyl表达发生在基因内启动子元件和5’启动子元件的控制下，该5’启动子元件为置于该tRNApyl编码序列5’的RNA聚合酶III启动子元件，这样使得所述基因内启动子元件和所述5’启动子元件的组合构成一个足以支持琥珀型抑制的杂合启动子。

13.根据权利要求11所述的真核宿主细胞或根据权利要求12所述的细胞系，其中该宿主细胞是哺乳动物细胞，或该细胞系是哺乳动物细胞系。

14.一种用于制备含有由琥珀密码子编码的一个或多个非天然氨基酸的靶蛋白的方法，该方法包括在权利要求12所述的真核细胞系中表达所述靶蛋白。