[发明专利]胰岛素测定法

说明书

本发明解决这样的问题：提供用于人胰岛素的乳胶凝集免疫测定法和测定试剂，由此抑制血液样品测定过程中的非特异反应。通过携带抗胰岛素抗体的颗粒的免疫反应在含有两种以上类型的具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中进行。

技术领域

本发明涉及人胰岛素乳胶凝集免疫测定和测定试剂，利用所述测定和测定试剂可以抑制血液样品测定中的非特异反应。

背景技术

人胰岛素，一种分子量为5807的肽，是用于诊断和治疗糖尿病的重要分子标志物之一。由于与浓度相关的原因，长期以来，竞争性RIA和化学发光免疫测定一直是用于人血液样品中胰岛素测定的主流免疫测定技术。随着近来高灵敏度乳胶浊度免疫测定(LTIA)的出现，已经报道了可用于生化自动分析仪的LTIA试剂，并且一些是可商购的。

非专利文献1中描述的技术是使用固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒的夹心LTIA。然而，仅有少数夹心LTIA用于实际肽测定应用的事例，并且所述技术涉及需要解决的问题。

引用列表

专利文献

PTL 1：WO2011/010673

非专利文献

NPL 1：Kanto Kagaku Cias Insulin II Attachment(2010年2月产生)

发明概述

技术问题

本发明人通过使用基于利用非专利文献1的方法获得的测量值与相关领域的非均质化学发光酶免疫测定(常规方法)中测量的值的偏差筛选的样品研究了抑制夹心LTIA中非特异反应的方法，并且发现，当用含有两种以上特定pH缓冲剂的缓冲液进行LTIA免疫反应时，可以减小与利用常规方法测量的值的偏差程度。基于该发现完成本发明。

问题的解决方案

具体地，本发明涉及以下各项。

[1]胰岛素测定法，所述测定法用于在含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中利用固定有抗胰岛素抗体的颗粒进行免疫反应。

[2]根据[1]所述的测定法，其中所述具有pH缓冲作用的胺化合物选自由HEPES、MES和Tris组成的组。

[3]根据[1]或[2]所述的测定法，其中所述缓冲液具有7.3至7.8的pH。

[4]在胰岛素的颗粒凝集免疫测定中抑制源自血液样品的非特异反应的方法，其中所述方法包括在含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中利用固定有抗胰岛素抗体的颗粒进行免疫反应。

发明的有益效果

本发明的测定法使得能够在血液样品测定中抑制非特异反应的同时进行人胰岛素乳胶凝集免疫测定。配制用于免疫测定的pH缓冲剂以实现抗原-抗体反应中的最佳pH，并且使用两种pH缓冲剂以加宽pH缓冲范围，或与主要pH缓冲剂组合以调节pH，已是普遍的做法。然而，在缓冲液中含有两种以上特定pH缓冲剂将抑制非特异反应是全新的发现。

附图简述

[图1]图1表示常规LTIA中获得的测量结果和本发明的测定法中获得的测量结果的相关图，其中上图表示化学发光酶免疫测定(Lumipulse Insulin，Fujirebio)和常规LTIA(Cias Insulin II，Kanto Kagaku)之间的相关性，而下图表示化学发光酶免疫测定(LumipulseInsulin，Fujirebio)和本发明的测定法之间的相关性。

实施方案描述

在本发明的测定法中用作分析物的血液样品是全血、血清或血浆。