[发明专利]用于治疗艰难梭状芽孢杆菌相关疾病的组成物及方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2013年3月14日提交的、美国临时申请序列号为NO.61/782,390的优 先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。

背景技术

艰难梭状芽孢杆菌(Clostridiumdifficile，Cd)是在医院内进行机会性感染的 新兴病原体，为造成人类抗生素相关疾病如伪膜性结肠炎及腹泻的主要原因。

艰难梭状芽孢杆菌的主要致病作用是透过两种大型蛋白毒素，毒素A(tcdA)及毒 素B(tcdB)，会破坏肠上皮细胞。tcdA及tcdB，为具有多个功能域(domains)的大型蛋白毒素 (250至308kDa)。于致病过程初期，艰难梭状芽孢杆菌(Cd)的受体结合域(RBD)首先与位于 结肠上皮细胞表面的碳水化合物结合。tcdA和/或tcdB再经由受体介导的内胞饮作用进入 细胞，并破坏维持细胞骨架所需的正常讯息传递途径，而最终导致发炎反应与腹泻。已知有 各种寡糖(包括三糖类α-半乳糖-(1,3)-β-半乳糖-(1,4)-β-N-乙酰葡萄糖胺)可特异结合 tcdA，但在人类中特异结合tcdA的配体尚未确定。

医院中接受抗生素治疗的患者，具有高度罹患艰难梭状芽孢杆菌感染的风险，尤 其是儿童及65岁以上老人。艰难梭状芽孢杆菌相关疾病因而导致额外医疗费用支出并延长 住院时间。因为致病毒株毒力的改变，使得艰难梭状芽孢杆菌相关疾病的发病率及死亡率 显著地增加。

因此，迫切需要研发用于对抗艰难梭状芽孢杆菌感染及Cd相关疾病的预防与治疗 的试剂。

发明内容

本发明是关于一种新颖多肽、融合多肽、编码所述多肽的核酸、含有所述多肽的免 疫治疗组成物及使用所述多肽的方法。

本发明含有CdtcdA之一或多个功能域的多肽和/或脂多肽(lipo- ploypeptides)，可用于制备对抗由Cd感染所引起的疾病的疫苗，用于诊断是否遭到Cd感 染，及用于制造免疫试剂。辨识结合此类多肽的单株或多株抗体，可用于诊断是否受到Cd感 染，及用于免除或治疗与艰难梭状芽孢杆菌感染相关的疾病。

因此，本发明是关于一种含有一或多个CdtcdA的功能域，如tcdA-RBD的单离多 肽。举例而言，所述的单离多肽可具有选自SEQIDNO:2、4、6及8-18任一者的氨基酸序列， 或具有与前述序列具至少80％以上(例如，85％、90％、95％、98％或99％)同一性的序列。该 多肽可进一步包含一脂质化序列。此类多肽可以脂质化形式表达。

本发明亦关于一种包含编码上述多肽序列的序列的单离核酸分子，及一种含有该 核酸分子的载体。

本发明进一步是关于一种与上述多肽特异结合的抗体或其抗原性片段。一种用于 诊断Cd感染或与该感染相关的疾病的套组，可包含一个或多种上述的抗体。

本发明亦关于一种包含所述tcdA-RBD或其片段的嵌合分子，其可连接到另一分 子，例如多肽、多糖、核酸或小分子化合物。该连接的多肽可包括分离自致病细菌或病毒的 抗原性表面蛋白质(antigenicsurfaceprotein)或多肽，如HIV膜蛋白、登革热病毒E蛋 白、流感病毒血凝素蛋白、呼吸道细胞融合病毒F蛋白及副流感病毒HN蛋白。该连接的多糖 可包括不同血清的寡糖分子，来自于细菌如肺炎球菌、脑膜炎球菌、流行性感冒嗜血杆菌、 鲍氏不动杆菌，或艰难梭状芽孢杆菌。

另一方面，本发明关于一种包含所述多肽、嵌合分子或核酸分子的免疫原性组成 物。此类免疫原性组成物可用于预防或治疗Cd感染或与该感染相关的疾病，或可用于诱发 免疫反应。

本发明亦关于一种含有一抗原及上述多肽作为佐剂的免疫原性组成物。

于以下的实施方式及伴随所附图式，将详加叙述一或多个具体实施例。其它特征、 标的及优点从下列描述、图式及专利范围中将是显而易见的。

附图说明

图1为显示(A)tcdA的C-端重复性序列；及(B)合理设计RBD同一性序列(SEQID NO：26)。假定的受体结合区以画底线的方式表示；

图2为在大肠杆菌系统表达rRBD或rlipo-RBD质体的示意图；