[发明专利]用于保持已手术去除的组织中的癌细胞活力的方法和试剂

说明书

一种组合物和方法，其用于生成试剂以及这些试剂的组合物，这些试剂用于通过用低摩尔浓度的协同化学品以及激素生长促进剂显著调节细胞代谢来稳定和保持已被手术切除的癌组织的活力以及暂停和/或终止凋亡(细胞死亡)，同时保持手术切除的组织的正常基因表达谱。

技术领域

本发明涉及生成用于已手术切除的癌组织的稳定、保存和活力的试剂以及试剂组合物的方法。

背景技术

几十年来，用来检测来自切除组织的癌细胞的用于病理分析的手术组织收集已经成为癌症诊断的标准实践。当前的组织样品收集方案要求将切除组织收集并置于福尔马林溶液中，并随后将其运送到病理实验室进行染色和分析。遗憾的是，福尔马林固定细胞(例如，杀死细胞)并且在这一过程中引起细胞完整性的显著改变，从而在准确地进行基因组检测(RNA、mRNA和蛋白质生物标志物分析，和基因表达研究)分析的能力方面产生问题。

分子技术，如采用实时聚合酶链反应技术(RT-PCR)进行的基因组检测，已发展到某些癌症可以匹配于特定的化学疗法的程度，该化学疗法已被证明响应于在癌细胞中发现的某些基因表达谱。因此，能够获得从患者切除的癌细胞的准确基因表达谱允许通过设计个性化的化学疗法以及其他处理来进行个性化健康照护。这是治疗范例的非常重要的转变，并将代表在不久的将来的医护标准。

已在福尔马林中保存的癌组织样品并非用于完成基因表达分析的活的组织样品。福尔马林并非对组织样品实现基因表达分析的良好试剂的一个原因是，福尔马林导致蛋白质缓慢交联成网状网络，并且由于有价值的靶蛋白质没有针对降解得到保护，因此它们可能被福尔马林处理破坏。

此外，随着福尔马林渗透组织样品，发生细胞死亡(凋亡)。癌细胞是独特的，因为它们具有代谢性预程序化凋亡，从而在福尔马林中发生加速的凋亡。随着组织样品中的细胞死亡，总细胞群体的子集裂解并释放宽范围的内部调节酶，这些内部调节酶进一步导致细胞死亡加速。这些酶中的许多酶将降解或破坏靶核酸DNA、RNA、mRNA、调节蛋白以及在分子基因组分析中使用的相关生物标志物。在固定过程中，福尔马林杀死了组织样品中的细胞，而基因表达可成为不稳定的，并且关键基因的基因组表达可变得欠表达或过表达，从而产生某些癌基因的表达的不准确值。这是在基于来自选定基因的特定mRNA的水平作出化学疗法决定时的主要问题。因此，当前不可能对在福尔马林中固定的癌细胞获得准确的基因组检测。

还应当注意的是，用福尔马林固定组织样品中的蛋白质和细胞需要约48小时才发生。这使得福尔马林过程不能非常准确地确定在从患者收集组织时有什么样的基因表达。

通常，从组织固定获得的遗传数据的科学有用性与组织的质量和该组织对于基因组检测的有用性直接相关。目前，福尔马林固定在获得准确的基因表达信息方面并不是非常有用的。因此，需要这样的试剂：其用于固定组织样品，以使得所收集的样品包含用于遗传检测的准确基因表达标志物。

还需要不像福尔马林那样危险的组织样品固定试剂。遗憾的是，福尔马林给使用者带来显著的癌症风险，以及关于含福尔马林产品的使用和处置的重要州及联邦规定。

本发明公开了用于制备允许收集从患者中手术去除的癌组织的试剂和试剂组合物的方法，其中组织样品中的癌细胞的遗传细胞信息保持在活的状态，使得组织样品适合于基因表达分析。

发明内容

本发明公开了制备用于组织样品如活检样品的细胞活力试剂的新方法，该细胞活力试剂允许样品中细胞的基因表达分析。

在制备用于组织样品的试剂的方法的大多数实施方案中，该方法包括：提供至少一种离液剂(chaotrope)，提供至少一种稳液剂(kosmotrope)，提供螯合剂，提供缓冲液，提供凋亡底物，提供代谢调节剂，以及将所述离液剂、稳液剂、螯合剂、缓冲液、凋亡底物以及代谢调节剂以能够进行组织样品的基因表达分析的方式混合。