[发明专利]表征溶酶体酶的方法

权利要求书

1.一种分析乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)蛋白质的方法，其包括通过毛细管区带电泳来表征HNS蛋白质的电荷分布。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述表征步骤包括通过毛细管区带电泳分离指示电荷变体不存在或存在的峰群的步骤。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述电荷分布包括至少14个峰群。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中所述电荷变体与改变量的唾液酸和/或M6P基团的不存在、存在相关联。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述电荷变体与改变量的单唾液酸化、双唾液酸化、三唾液酸化聚糖、单M6P、双M6P基团及其组合的不存在、存在相关联。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述表征步骤包括定量地确定每个峰群的相对迁移时间和/或相对峰面积。

7.如权利要求6所述的方法，其中每个峰群的所述相对迁移时间是相对于电渗流(EOF)标志物来确定的。

8.如权利要求6或7所述的方法，其中通过与总峰面积比较的峰面积百分比来计算每个峰群的所述相对峰面积。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括确定所述HNS蛋白质的质量。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HNS蛋白质是由哺乳动物细胞产生。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是人类细胞。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HNS蛋白质是大规模生产。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括与参照相比，确定所述HNS蛋白质的电荷分布是否存在变化。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述参照是由不同批次生产的HNS蛋白质的电荷分布。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述方法还包括评估批次间电荷变化性的步骤。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述评估批次间电荷变化性的步骤包括比较每个由不同批次生产的HNS蛋白质的相对峰面积相对于峰群的趋势图。

17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述毛细管区带电泳是在使得较长的迁移时间对应于增加负电荷的物质的条件下进行。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用包含Tris的缓冲系统进行所述毛细管区带电泳。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述缓冲系统包含浓度在约20-30mM范围内的Tris。

20.如权利要求18或19所述的方法，其中所述缓冲系统包含浓度为约25mM的Tris。

21.如权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述缓冲系统具有在约7.8-8.2范围内的pH。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述缓冲系统具有约8的pH。

23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用长度在56-112.5cm之间的范围内的毛细管进行所述毛细管区带电泳。

24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述毛细管具有约72cm或104cm的有效长度。

25.一种制造方法，其包括根据权利要求1-24中任一项所述的方法通过毛细管区带电泳分析大规模制造的乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)蛋白质的步骤。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述制造方法包括基于所述电荷分布的分析来调节制造条件的步骤。

27.如权利要求25所述的方法，其中所述分析步骤在释放一定批量之前进行。

28.一种药物组合物，其包含基本上纯的乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)蛋白质，所述基本上纯的乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)蛋白质如通过毛细管区带电泳所确定表征为电荷分布包括至少14个指示所述HNS蛋白质的电荷变体的峰群。