[发明专利]用于检测生物系统中的蛋白酶活性的组合物和方法

权利要求书

1.一种检测切割试剂和靶标在受试者或样品中的存在或不存在的方法，所述方法包括：

(a) 使受试者或生物样品与可活化抗体接触，所述可活化抗体包含：特异性地结合靶标的抗体或其抗原结合片段(AB)；掩蔽部分(MM)，其抑制处于未切割状态的可活化抗体的AB与靶标的结合；和与AB偶联的可切割部分(CM)，其中所述CM是作为蛋白酶的底物起作用的多肽，和

(b) 测量所述受试者或生物样品中的活化的可活化抗体的水平，

其中所述受试者或生物样品中的活化的可活化抗体的可检测水平指示所述切割试剂和所述靶标存在于所述受试者或生物样品中，且其中所述受试者或生物样品中的活化的可活化抗体的不可检测水平指示所述切割试剂、所述靶标或所述切割试剂和所述靶标二者都不存在或不以可检测水平存在于所述受试者或生物样品中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述可活化抗体包含可检测标记。

3.根据权利要求1所述的方法，其中使用特异性地结合活化的抗体的第二试剂完成测量受试者或样品中的可活化抗体的水平，其中所述试剂包含可检测标记。

4.根据权利要求2或权利要求3所述的方法，其中所述可检测标记包含显像剂、造影剂、酶、荧光标记、生色团、染料、放射性同位素、一种或多种金属离子、或基于配体的标记。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法是体内方法。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法是原位方法。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法是先体外后体内方法。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法是体外方法。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述可活化抗体在未切割状态具有如下的从N-端至C-端的结构排列：MM-CM-AB或AB-CM-MM。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标选自在表1中列出的靶标的组。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述AB是或衍生自选自在表2中列出的抗体的组的抗体。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述其抗原结合片段选自Fab片段、F(ab')₂片段、scFv和scAb。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述MM就与AB的结合而言的平衡解离常数大于AB与靶标的平衡解离常数。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述MM不会干扰或竞争处于被切割状态的可活化抗体的AB与靶标的结合。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述MM是长度不超过40个氨基酸的多肽。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述MM多肽序列不同于所述靶标的序列，且其中所述MM多肽序列与AB的任何天然结合配偶体具有不超过50%同一性。

17.根据权利要求1所述的方法，其中所述MM不包含与所述靶标的超过25%氨基酸序列同一性。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述MM不包含与所述靶标的超过10%氨基酸序列同一性。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述CM是蛋白酶的底物，所述蛋白酶选自在表3中列出的蛋白酶的组。

20.根据权利要求1所述的方法，其中所述CM是长度为至多15个氨基酸的多肽。

21.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白酶与组织中的靶标共定位，且其中当所述可活化抗体暴露于所述蛋白酶时所述蛋白酶切割可活化抗体中的CM。

22.根据权利要求1所述的方法，其中所述可活化抗体包含在MM和CM之间的连接肽。

23.根据权利要求1所述的方法，其中所述可活化抗体包含在CM和AB之间的连接肽。

24.根据权利要求1所述的方法，其中所述可活化抗体包含第一连接肽(LP1)和第二连接肽(LP2)，且其中处于未切割状态的可活化抗体具有如下的从N-端至C-端的结构排列：MM-LP1-CM-LP2-AB或AB-LP2-CM-LP1-MM。