[发明专利]免疫原性多肽表层表达双歧杆菌

说明书

技术领域

本发明涉及免疫原性多肽表层表达双歧杆菌，更详细而言，例如，涉及能够制造丙型肝炎疫苗组合物的免疫原性多肽表层表达双歧杆菌。

背景技术

丙型肝炎病毒(HCV)的携带者在世界中有1亿7000万人以上，约70％暴露于转变为慢性肝炎、肝硬化、肝癌的风险中。在日本也存在约200万人的携带者，其中约80％为1b型感染。

作为丙型肝炎的治疗，主要进行干扰素治疗。但是，采用组合了聚乙二醇干扰素α与抗病毒药利巴韦林的并用疗法，1型病毒排除率为50％以下，并且治疗期间长，副作用大，因此，需要更有效的治疗药的开发和治疗法的建立。

HCV是属于黄病毒科的正链RNA病毒，包括4种结构蛋白区域(C-E1-E2-P7)和6种非结构蛋白区域(NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B)。其中，NS3蛋白在N末端侧的三分之一具有丝氨酸蛋白酶活性，C末端侧的三分之二具有RNA解旋酶活性。对于这样的具有蛋白酶-解旋酶的2种活性的NS3蛋白，为了解明立体结构，通过X射线结晶解析研究了其立体结构(非专利文献1)。

HCV感染被治愈的患者中，可见NS3特异性强免疫应答(非专利文献2)。另外，NS3蛋白在遗传学上的保守性高，鉴定出大量细胞毒性T细胞(CTL)表位(非专利文献3)。

报告了用于丙型肝炎的预防或治疗的源自NS3蛋白的多肽的利用。例如，在专利文献1中，记载了含有源自HCV的NS3区域的氨基酸1188～1463位的至少8个氨基酸连续的氨基酸或由其构成并含有T细胞刺激性表位的多肽。在专利文献2中，记载了将表达含有与HCV核序列的至少一部分连结的HCVNS3蛋白酶的至少一部分的HCV融合蛋白的酵母细胞作为疫苗的基础。在专利文献3，记载了将表达NS3等的全长蛋白质或免疫原性蛋白质、分泌的弱毒化单核细胞增多性李司忒菌(Listeriamonocytogenes)等细菌作为疫苗平台。

另一方面，着眼于将通过基因重组得到的转化微生物作为口服疫苗使用的方法。报告了对小鼠口服给药转化长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)，该转化长双歧杆菌使用存在于双歧杆菌属微生物(本说明书中，也称为“双歧杆菌”)的细胞膜的GNB/LNB基质结合膜蛋白(本说明书中，也称为“GLBP”)在表层表达源自鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)的鞭毛蛋白(flagellin)，由此，在血中产生鞭毛蛋白特异性抗体，通过肠道粘膜免疫而诱导全身性免疫，从而有效抑制鼠伤寒沙门氏菌的经口感染引起的小鼠的致死作用(非专利文献4和专利文献4)。另外，还报道了由含有转化长双歧杆菌的耐酸性胶囊制剂构成的口服疫苗，该转化长双歧杆菌在细胞内或分泌表达源自鼠伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌(Vibriocholerae)或痢疾志贺菌(Shigelladysenteriae)的鞭毛蛋白(专利文献5)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表平9-504534号公报

专利文献2：日本特表2008-516610号公报

专利文献3：日本特表2011-529077号公报

专利文献4：国际公开第2011/034181号

专利文献5：国际公开第2008/114889号

非专利文献

非专利文献1：Structure，7卷，1353-1363页，1999年

非专利文献2：J.Gene.Med.，10卷，177-186页，2008年

非专利文献3：J.Clin.Invest.，95卷，521-530页，1995年

非专利文献4：Vaccine，28卷，6684-6691页，2010年

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于提供一种用于HCV感染的治疗的更有效的治疗药。本发明的目的还在与提供一种通过口服给药对HCV感染引起的疾患的治疗有效的治疗药。本发明的目的还在于提供一种用于在双歧杆菌的表层表达免疫原性多肽的方法。

用于解决课题的方法