[发明专利]生物流体中脱落或循环的肿瘤细胞的检测方法

说明书

本发明涉及使用被标记的垂体腺苷酸环化酶活化肽或血管活性肠肽检测生物流体中脱落或循环的肿瘤细胞的方法。

发明介绍

本申请要求2013年2月15日提交的美国临时申请US61/765,329的优先权的权益，其内容以其整体通过参考而引入本文中。

本发明得到美国国立卫生研究院的政府资助，授予的合同号为CA157372-01A1。政府对于本发明享有某些权利。

背景技术

有证据表明，在出现临床症状前的早期疾病阶段，原发癌开始脱落肿瘤细胞进入循环。恶性肿瘤的特征是它们入侵相邻组织的能力。整体而言，直径1mm的肿瘤血管化，动物研究表明肿瘤中存在的多达4％的这种细胞能够在24h的时间段内脱落进入循环(Butler&Gullino(1975)Cancer Res.35：512-516)。

已经描述了多种分离和检测血液中肿瘤细胞的方法。例如，US6,190,870教导了免疫磁珠分离随后流式细胞计数。然而，还是没有可视化的样品分析。US6,197,523描述了对100μl血液样品中的癌症细胞进行计数。该方法使用毛细管显微镜对发现的细胞的识别进行确认。进一步地，US6,365,362描述了对样品进行免疫磁珠富集和分析以确定血液中的肿瘤细胞的方法。根据该专利的方法，对于存在核酸和其它标记的分离细胞进行标记，这使得在分析过程中排除非目标样品成分。WO02/20825描述了通过粘附基底来计数肿瘤细胞。简而言之，用将与具有转移潜能的癌细胞结合的特定粘附分子涂覆基底。然后分析基底上捕获细胞的存在和类型。

近来药物开发的方法集中于了解疾病的发生以及在分子水平控制疾病的生物医药途径。先前的研究表明VPAC(血管活性肠肽(VIP)和垂体腺苷酸环化酶活化肽(PACAP)的总称)受体在BC细胞上以高密度过表达(Reubi，等.(2000)Cancer Res.60(11)：3105-3112)。VPAC受体涉及细胞增殖、细胞分化，以及BC细胞的存活。在基质、正常细胞和良性肿块上，只表达少量的VPAC受体(Reubi，等.(2000)同上；Zia，等.(1996)Cancer Res.56(15)：3486-89；Leyton，等.(1999)Breast Cane.Res.Treat.56(2)：177-186；Moody&Gozes I(2007)Curr.Pharm.Des.13(11)：1099-1104；Valdehita，等.(2010)Peptides 31(11)：2035-2045；Valdehita，等.(2012)Mol.Cell Endocrinol.348(1)：241-246)。