[发明专利]阿尔兹海默症诊断的组合物和方法

说明书

发明背景

阿尔兹海默症(AD)是一种慢性神经退行性疾病，目前通过导致严重痴呆的进行性认知障碍和记忆丧失来鉴定。AD是典型的老年性疾病，主要在超过65岁的人群中流行。它是老年人痴呆的主要原因，并且随着预期寿命越来越高，在该人群中的流行只会开始增加。AD不是典型的威胁生命的疾病，但是随着该疾病发展为严重痴呆，患者不能照顾自己，并且通常需要全职的专业护理。

目前没有已知的AD的治愈，但是有可以减缓疾病进程的治疗。因此能够鉴定AD患者并可能地监测他们对治疗的反应的方法将是非常有用的检测(临床医生使用的工具)。

AD诊断的现有方法包括精神评估(如MMSE)、CT/MRI、本领域已知的与AD有关的脑脊液的特定Tau蛋白或β-淀粉样蛋白亚型的检测，或者对遗传风险因子如载脂蛋白E4(ApoE4变体)进行基因分型；目前没有AD的临床有效的血液生物标志物。这些方法的缺陷包括缺少特异性，在解释上可能产生错误，并且可能具有强侵袭性；通常只能在尸体解剖后才能进行真正的诊断。目前没有常规使用的生物标志物方法来帮助进行AD的阳性诊断。

AD的发病机理并非完全清楚，但是对患者的病理学调查显示存在神经元纤维缠结(由Tau蛋白积聚引起)和β-淀粉样蛋白斑块。也有广泛的神经元和突触丢失，这被认为是认知和记忆功能降低的基础。斑块的形成显示可以引起神经退行性变，但是斑块形成的原因并不知道。鉴定这些蛋白的特定亚型的诊断测试已经成为诊断分析发展的主要关注点。然而，这些蛋白的存在可能预示疾病进程已经过了可治疗阶段，因此，更早的风险标志物可能更有利。

已有一些描述使用血液生物标志物诊断AD的方法的发明，它们包括：EP 2293075 A2和WO 2011/143597 A1。EP2293075使用2-D凝胶电泳鉴定血液血小板中表达的一些标志物，其在AD患者和对照患者中是差异表达的。这些包括可能对应于AD遗传易感性的蛋白变体。这些发明者还描述了一项发明(EP2507638)，其中在算法中将这些蛋白生物标志物与基因分型结合，从而改善诊断模型。在这一算法中，与ApoE4阴性但表达两个拷贝的野生型谷胱甘肽S-转移酶1Ω(wtGSTO)基因的患者相比，ApoE4阳性的患者更易于患有AD。在这一在先发明的内容中，wtGSTO被限定为不含有rs4825突变(其在140位残基[A140D]编码天冬氨酸而非丙氨酸)的任何GSTO基因。该发明强调将基于血液的生物标志物与基因分型组合的有效性，从而帮助疾病的诊断。WO2011/143597 A1利用多路复用分析鉴定了多种生物标志物，这些生物标志物在AD与对照患者的血清之间是差异表达的。在该发明中，当使用多种生物标志物的组合，并结合临床检测和人口统计变量时，采用随机森林法来建立分类算法，观察到了更高的诊断准确度。然而，并未发现这些方法的临床实用性，并且人们急需一种可以常规使用的方法以帮助AD的诊断。

发明概述

本发明涉及阿尔兹海默症诊断的方法和组合物。

本发明鉴定和描述了相对于其在正常阶段的表达，在阿尔兹海默症阶段差异表达的蛋白。

根据本发明第一方面，提供一种在对象中诊断阿尔兹海默症的方法，所述方法包括检测取自对象的样本中两种或更多种选自表1的差异表达的蛋白，其中这些蛋白之一为Afamin。更具体地，一种包括检测取自对象的样本中Afamin和下述蛋白中任一种的水平的方法：α-1-抗凝乳蛋白酶、α-2-巨球蛋白、载脂蛋白B100、补体C3、丝氨酸苏氨酸激酶TBK-1、维生素D结合蛋白、α-1-B糖蛋白、血液结合素、血清白蛋白、血浆铜蓝蛋白、α-2-抗纤维蛋白溶酶、载脂蛋白A1、补体因子H、IgG、IgG fc结合蛋白、角蛋白、纤维蛋白原或补体C5。样本优选为血清或血浆。

根据本发明的又一方面，将差异表达的蛋白的相对水平连同对象的ApoE或GSTO1基因型或表型一起应用，以增强区分有发展为AD风险或患有AD的患者与那些没有风险或未患有AD的患者的能力。

根据本发明的又一方面，提供一种检测取自对象的样本中选自表1的差异表达的蛋白的方法，其中将蛋白的特定探针附于设备表面。基于样本中这些蛋白与生物素化的示踪物质竞争的能力，计算其相对水平。示踪物质是修饰的血浆，其所含的蛋白与生物素结合。