[实用新型]鸡繁殖基因启动区SNP分型及启动子活性检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，利用PCR-RFLP和双报告基因技术检测提供一种鸡繁殖性状相关基因——多巴胺受体D1(DRD1)5’调控区SNP分型及启动子活性快速检测试剂盒。

背景技术

多巴胺受体D1(dopamine receptor D1gene,DRD1)是由七个跨膜区域组成的G蛋白偶联受体家族成员之一。在鸟类中，多巴胺通过血管活性肠肽激活DRD1在下丘脑的水平来刺激催乳素的分泌(Youngren at el,2002)，且经过多巴胺受体阻断剂处理的母鸡抑制了催乳素的分泌，导致了就巢性的终止(Millam at el,1980；Shi at el,1999)，说明鸟类的繁殖行为和多巴胺受体的调节有关。鸡DRD1基因广泛表达于下丘脑和垂体且此表达与鸡的生殖系统有关，且在催乳素较多的产蛋期，DRD1基因在垂体的表达量增加(Chaiseha at el,2003)，说明DRD1基因可能是控制鸡繁殖性状的主效基因或候选基因。

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)，作为第三代遗传标记已得到飞速发展，目前已经有多种发展成熟的检测技术，如单链构象多态性(SSCP)、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)、DNA芯片以及Taqman探针等技术手段。限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术就是利用PCR扩增目的DNA，扩增产物再用特异性内切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝胶电泳上分型。该技术具有特异性高、检测快速、通用性强、适用范围广、成本低廉等特点，目前已成功应用于人类疾病及禽病相关基因分子标记的SNP检测和基因诊断试剂盒的研发。

报告基因是一种编码某种易于检测蛋白质或酶的基因，通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。该技术的主要优点是高灵敏度、可信性及检测方便且适合大规模检测。目前已广泛应用于启动子分析、监控转基因及其表达、细胞的信号转导与药物的筛选等多种细胞事件。随着技术和检测方法的进步，荧光分析以其能够将细胞内报告基因的活性可视化和对细胞的非破坏性而越来越成为主流，因此荧光素酶和绿色荧光蛋白这两种可发出荧光的报告基因成为众多报告基因中的后起之秀。双报告基因技术结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速、灵敏、简便。报告基因表达活力的相对改变与偶联调控启动子转录活力的改变相关，双报告基因技术使偶联到组成型启动子的第二个报告基因，提供转录活力的内对照，使测试不被实验条件变化所干扰，确保了实验结果的准确性。

经过对现有国内外文献和专利的检索，至今未见有DRD1基因5’调控区多态性位点及其启动子活性与鸡繁殖性状相关性的报道。

实用新型内容

本实用新型的目的是为了给鸡繁殖性状相关基因——DRD1基因5’调控区G-570A(由启动子的第一个碱基向调控区方向的第570个碱基)位点的检测提供一种基因分型及启动子活性检测试剂盒，该试剂盒准确性高、快速、价格低廉。

本实用新型的目的是通过以下技术方案实现的，鸡繁殖性状相关基因——DRD1基因5’调控区SNP分型及启动子活性快速检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有衬垫，衬垫上设有孔腔，孔腔内分别设有用于DRD1基因5’调控区PCR扩增的上下游引物混合物P、DNA Tag酶、DNA Tag酶扩增缓冲液、dNTP、内切酶缓冲液、MspI内切酶、pGL3-DRD1-570-GG-Basic/promoter质粒1、pGL3-DRD1-570-AA–Basic/promoter质粒2、pGL₃-Basic质粒3、pRL-CMV质粒4、转染试剂、1×PBS、Dual-Glo Luciferase Reagent双荧光素酶试剂、Dual-Glo Stop&Glo Substrate双荧光素酶终止反应底物、Dual-Glo Luciferase Reagent Buffer双荧光素酶缓冲液。

优选地，所述盒体横截面是圆形。

优选地，所述盒体上设有盒盖，盒盖为圆形。

引物混合物P表示用于DRD1基因5’调控区PCR扩增的上下游引物混合物，引物信息如下：

上游引物S：5'ACAAAGTGAAGAATTGCTCGCCG 3'

下游引物A：5'GCAATCACTTTTCCATGCTTGCAT 3'。