[实用新型]氨基末端脑钠肽前体免疫层析定量检测试纸条

说明书

技术领域

本实用新型属于免疫检测领域，具体涉及一种高灵敏度氨基末端脑钠肽前体免疫层析定量检测试纸条。

背景技术

脑利钠肽(BNP)是一种心脏神经激素，当心室壁张力增加时，心室肌细胞受到牵拉刺激，就会以激素原的形式爆发式合成，最后裂解为由32个氨基酸组成的BNP分子与76个氨基酸组成的氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)片段，并将2者同时释放人血循环，发挥生物活性。血清中NT-proBNP分子与BNP分子以1∶1的比例存在于血循环中。BNP及NT-proBNP自其被发现以来即受到广泛的重视。首先研究者们发现其与心力衰竭有着极为密切的关系，后来又证实其与缺血性心脏病明显相关，近来许多研究表明其对于其它多种心血管疾病亦有重要价值。我国2007年《慢性心力衰竭诊断治疗指南》推荐将BNP和NT-proBNP用于慢性心衰的诊断和预后判断。

目前检测氨基末端脑钠肽前体的常用方法有：

1胶乳凝集法 

胶乳凝集法是临床较常用的血清学方法，属于间接的凝集试验。胶乳试剂用纯化的抗人NT-proBNP抗体致敏，能和病人血清中NT-proBNP发生特异性反应，数分钟内呈现清晰的凝集颗粒，出现凝 集者为阳性，未出现凝集者为阴性。此方法操作简单、快速，敏感性、特异性较高。但易受补体、类风湿因子(RF)等因素的干扰，产生假阳性结果。因此，为了提高结果的准确性，检测时应对待测标本进行预处理，以去除干扰因素。

2免疫透射比浊法

免疫透射比浊法是实验室常用检测方法。免疫透射比浊法也是一种微量的免疫沉淀测定法。其与速率散射比浊法不同的是以测定透过溶液的光量来反映待测抗原的含量。当光线透过反应体系时，溶液中的抗原抗体免疫复合物可对光线加以吸收和反射，使透射光减少。免疫复合物越多，吸收的光线越多，透射光越少，这种变化可用吸光度表示。若抗体量固定，所测吸光度与免疫复合物的量成正比，也与待测抗原的量成正比。以一系列已知浓度的抗原标准品作对照，即可以测出受检物含量。

3免疫标记技术 

免疫标记技术用于NT-proBNP测定的免疫标记方法有放射免疫法、酶免疫法、金标免疫法、荧光标记免疫法等。IRNA法灵敏度和特异性高，且不需要分离纯化血浆，比RIA法快捷实用，但需要耗时5～36小时，不适合用于自动分析系统，Abbott公司推出的BNP试剂采用双单克隆抗体、微粒子酶免疫法在Axsym仪上测定，每个小时可以测定56份样本，Biosite公司的BNP-TRLAGE用于临床快捷定量检测，以荧光为标记抗体基础，一份单独的样品只需要15分钟即可得出结果。

生物素-亲和素系统(biotinavidin system，BAS)，是一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世，BAS很快被广泛应用于医学各领域。将该系统应用于免疫组化，酶联免疫，荧光免疫，放射免疫等检测技术中，可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性，使方法更简便，有助于临床快速诊断，并利于进行大规模流行病学调查，成为研究免疫反应的有力工具。由于BAS检测系统经济快速，又无放射物质污染，不需复杂仪器，充分显示了此系统的巨大潜力和应用的可能性。

生物素-亲和素系统检测原理：BAS是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素与亲和素间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质，链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素，因几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。利用生物素-亲和素系统研制氨基末端脑钠肽前体检测试快速诊断试剂尚无报道。

实用新型内容

本实用新型的目的，在于提供一种氨基末端脑钠肽前体免疫层析 定量检测试纸条，其基于双抗体夹心法、荧光免疫侧向层析和生物素-链霉亲和素放大系统，提供高灵敏度氨基末端脑钠肽前体免疫层析定量检测试纸条。使用本实用新型时，提高了检测灵敏度和检测稳定性，降低了非特异性结合，检测时间不大于10分钟，大大提高了诊断效率。