[实用新型]一种抗ASCA抗体免疫层析试纸条

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种层析试纸条，属于医学免疫分析检测领域。

技术背景

炎性肠病(IBD)包括克罗恩病(CD)与溃疡性结肠炎(UC)，其病因迄今仍不明确。IBD在全球范围内分布具有明显地域差异性，其在欧美国家高发，尤其是北美和北欧。以前认为IBD在亚洲国家包括中国发病率很低，但近20年来中国报道的临床IBD病例越来越多，其发病呈上升趋势。目前的临床诊断条件下，在UC与CD及IBD与非IBD的鉴别诊断上有时很困难，在缺乏组织学证据时，需有更多相对特异性的标志物为诊断提供帮助。研究发现，多种非侵入性的生物活性标志物对IBD的诊断及炎症活动性的评价具有重要意义。

IBD是北美和欧洲的常见病，近30年来日本IBD发病率亦呈逐步增高趋势，我国虽尚无普通人群的流行病学资料，但近10多年来本病就诊人数呈逐步增加趋势则非常明显。IBD的临床表现复杂多样，不仅有消化道症状，还可有肠外表现。由于症状为腹痛、腹泻、便血等非特异性肠炎表现，CD与UC，以及IBD与结核性肠炎等其他肠道慢性疾病很难鉴别诊断。

目前鉴别UC与CD的生物标志物主要集中在自身免疫抗体与抗微生物抗体。其中抗酿酒酵母甘露聚糖IgA(anti-Saccharomyces cerevisiae immunoglobulin A，ASCA-IgA)和抗酿酒酵母甘露聚糖IgG(anti-Saccharomyces cerevisiae immunoglobulin G，ASCA-IgG)是两种已被临床广泛认可的CD指标，大约有35～50％的CD患者ASCA-IgG阳性，另有约25～30％的CD患者ASCA-IgA阳性。

现有的抗ASCA-IgA和ASCA-IgG抗体检测方法是酶联免疫吸附试验(ELISA)，由于与CD相关的ASCA有IgG和IgA两种类型，ELISA方法需要分别检测，并且操作过程需要专业人员进行检测，操作步骤复杂，且检测时间较长，一般需6-10小时。

本实用新型用提取纯化自酿酒酵母细胞壁的ASCA抗原，包被在检测带或结合垫上，分别或同时显色抗ASCA-IgG和抗ASCA-IgA条带。与现有技术ELISA相比，本实用新型用胶体金/彩色胶乳标记制备的免疫层析试纸条，实现同时检测IgG和IgA抗体。

免疫层析法(immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等，其中以纳米金应用最为广泛，纳米金也称为胶体金。

以胶体金作为失踪标记物的免疫层析技术特称为免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique，GICT)。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态而得名。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

表面带活性基团的彩色胶乳微球也可以作为免疫层析的示踪剂，与胶体金技术一样，彩色胶乳标记免疫层析技术也具有操作简便、试剂稳定、快速出结果、可室温保存等优点。彩色胶乳标记是将不同直径范围0.1um-1um彩色胶乳微球与含有羧基、氨基、羟基等酯类或其他大分子物质共价结合，使这些大分子标记上颜色，当在检测线或质控线上富集停留后形成肉眼可见的彩色条带。

与现有技术ELISA和化学发光法相比，免疫层析法检测的优点主要包括：(1)使用方便快速，便于基层使用和现场使用，所有反应能在20分钟内完成；(2)成本低，不需要特殊的仪器设备；(3)应用范围广，可适应多种检测条件；(4)可以进行多项检测，若阳性样本比较难获得，，多项检测可以节省样品，降低成本；(5)标记物稳定，标记样品在4℃贮存两年年以上，无信号衰减现象；(6)胶体金本身为红色，不需要加入发色试剂，省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤，对人体无毒害。