[实用新型]一种人乳头瘤病毒(HPV)分型检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，具体涉及到一种能用于分型和检测18种人类乳头瘤病毒(HPV)亚型的试剂盒，可以用于妇女人乳头瘤病毒(HPV)感染的高通量筛查和宫颈癌等癌症致病机理的研究。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一种嗜上皮病毒，感染人体皮肤及粘膜复层鳞状上皮。HPV感染引起多种良性和恶性肿瘤。据估计，大约有5.2％的人患癌症与HPV感染有关，包括90-93％的肛门癌，12-63％的口咽癌，36-40％的阴茎癌，40-51％的会阴癌，40-64％的阴道癌和99.7％的宫颈癌等。到目前为止，已经确定的HPV亚型有100多种，按其潜在的致癌能力可分为高危型(High-risk，HR)HPV，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82、共15种；疑似高危型HPV，包括HPV26、53和66，共3种；低危型(Low-risk，LR)HPV，包括HPV6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81和CP6108等。

HPV是一种双链闭环DNA病毒，含约8k左右碱基，编码区编码6个早期开放阅读基因E1、E2、E4、E5、E6和E7，以及2个晚期开放阅读基因L1和L2。L1开发阅读框是HPV DNA基因组内最保守的基因，常被用于HPV亚型的区分和鉴定。如果一个HPV的L1DNA序列与其它HPV的L1DNA序列有超过10％的差异，就被定义为另一种亚型。不同的HPV亚型感染后引起的疾病类型有很大的差别，例如高危型HPV感染后与宫颈癌的发生有密切关系，低危型HPV的感染常引起外生殖器的湿疣等良性病变。同一种高危型HPV的持续感染大大增加了被感染者罹患宫颈癌的机会，所以对HPV基因亚型的鉴定，其意义特别重大。

到目前为止，国内各家医院的妇科检查常采用美国FDA(Food and Drug Administration)批准的杂交捕获法II(Hybrid Capture II，HC2)来检查HPV的感染情况，但此方法只能检测13种高危型HPV的存在与否，不能分型，不能区分单独感染和混合感染，而且，该方法的技术过程是通过核酸杂交来进行的，因此结果常有大量的假阳性和准确率低的缺点，此外，HC2方法成本高，通量低，所以建立一种高通量、高准确率、能够分型和价格低廉的HPV检测和鉴定的方法势在必行。

实用新型内容

本实用新型的目的是旨在解决现有HPV的检测方法不能分型，准确率低，通量低和价格高的缺点，利用基质辅助激光解吸收/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)系统检测技术，开发一种人乳头瘤病毒(HPV)分型检测试剂盒

本实用新型所采用的技术方案为：建立一种人乳头瘤病毒(HPV)分型检测试剂盒，包括包括盒体(1)、衬垫(2)、在衬垫(2)上设有数个容器孔，用于放置试管，试管中分别装有缓冲液A(3)、MgCL₂(4)、dNTP(5)、ddH₂O(6)、HotstarTaq聚合酶(7)、正向引物(8)、反向引物(9)、缓冲液B(10)、SAP酶(11)、缓冲液C(12)、iPLex终止反应液(13)、iPLex酶(14)、延伸引物(15)。

在上述的分子生物学试剂中，缓冲液A(3)装量为200μL；MgCL₂(4)的装量为100μL；dNTP(5)的装量为100μL、ddH₂O(6)的装量为500μL、HotstarTaq聚合酶(7)的装量为10μL、正向引物(8)的装量为100μL、反向引物(9)的装量为100μL、缓冲液B(10)的装量为200μL、SAP酶(11)的装量为10μL、缓冲液C(12)的装量为200μL、iPLex终止反应液(13)的装量为100μL、iPLex酶(14)的装量为10μL、延伸引物(15)的装量为100μL。

所述的衬垫设置在盒体内，衬垫上设有容器孔，用于放置装有各种试剂或引物的试管，根据试管内的内容分三个单元。其中第一单元为PCR扩增单元，含有：缓冲液A(3)、MgCl₂(4)、dNTP(5)、ddH₂O(6)、HotstarTaq聚合酶(7)、正向引物(8)、反向引物(9)。

其中正向引物(8)的序列为：

SEQ ID No.1ACGTTGGATGTTTGTTACTGTGGTAGATACYAC

SEQ ID No.3ACGTTGGATG ACACAACTGTGTTCACTAGC