[实用新型]检测肝癌标记核酸分子的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物检测领域，具体而言，涉及检测肝癌标记核酸分子的试剂盒。

背景技术

肝细胞性肝癌(HCC)是肝脏最常见的恶性肿瘤，占世界范围内癌症相关死亡的第三位。由于利用现有的肝癌诊断方法大多数肝癌患者被确诊时已为晚期，导致其5年生存率低至10％-15％，所以对癌症发生的早期预测和早期检测对于选择有效的治疗方法来说至关重要。目前使用得最广泛的肝癌测定方法包括血清甲胎蛋白(AFP)检测和B超等影像学检查等。然而，这些传统的方法都不能用作肝癌早期预测的理想指标。相当多的肝细胞性肝癌病人表现出甲胎蛋白水平低或正常，与之相反，约20％-25％的慢性肝炎、肝硬化及其他肝脏疾病患者具有较高AFP水平。

另一方面，虽然改进的成像技术使人们有可能发现肝脏局灶性小病变，但是还很难区分良性病变与肿瘤，并且诊断结果与技术操作人员的经验密切相关，受主观因素影响较大。

由此可见，由于血清甲胎蛋白和影像学检查都不是理想的肝癌预测及检查方法，也就促使研究者去发现更加敏感和特异的标志物，以期利用这些可能的方法对肿瘤高危人群发生肝细胞性肝癌的可能性进行早期预警。

循环核酸是指存在于血液(血浆或血清)中的细胞外游离DNA和RNA。肿瘤患者血循环中核酸含量明显高于正常人，研究证实其来源于肿瘤细胞，并且与原发肿瘤有着结构或功能上的某些一致性，因此循环核酸对肿瘤的诊断、治疗和预后评估都有着重要的价值。

早在20世纪70年代末，人们就发现癌症患者血浆DNA含量增加，80年代末相继发现肿瘤患者的血浆或血清DNA具有肿瘤DNA的特征性改变，如链的稳定性降低、瑚和n53基因突变、微卫星改变、肿瘤抑癌基因启动子的高甲基化、免疫球蛋白重链DNA重排、线粒体DNA突变和肿瘤相关病毒DNA等。

最近，人们又发现癌症患者血浆或血清中存在肿瘤相关RNA，如酪氨酸酶RNA、端粒酶成分RNA、不同肿瘤相关基因编码的mRNA和病毒RNA等。目前，基于PCR技术的多种方法可以对极微量的循环核酸进行检测和定量，循环核酸测定已成为肿瘤分子诊断学中一个新的研究靶点。具体的，可以通过检测慢性乙肝患者的血清样本，以及其中发生肝癌的患者确诊半年至一年以前的血清样本，进行小分子核酸差异表达谱分析，通过筛选出与未发生肝癌者相比差异表达的特异性小分子核酸，作为肝癌标记核酸分子，再通过定量检测进而确定其含量，通过其含量分析实现肝癌早期预警分析。

然而，在相关技术中，还没有一种用于检测上述肝癌标记核酸分子的试剂盒。因此，为了实现快速准确的检测上述的肝癌标记核酸分子，并准确的进行肝癌早期预警，提供一种用于检测肝癌标记核酸分子的试剂盒及其检测方法是本领域亟待解决的一个技术问题。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种检测肝癌标记核酸分子的试剂盒，以解决上述的问题。

在本实用新型的实施例中提供了一种检测肝癌标记核酸分子的试剂盒，包括盒体、用于提取RNA的试剂、逆转录试剂、PCR扩增试剂、无RNA酶的纯水、阴性质控品、阳性质控品以及用于分隔收集所有试剂的试剂瓶或试剂管；

所述盒体的内底壁上设置有第一试剂架、第二试剂架和第三试剂架；

装有所述逆转录试剂的试剂瓶或试剂管设置在所述第一试剂架上；装有所述PCR扩增试剂的试剂瓶或试剂管设置在所述第二试剂架上；装有无RNA酶的纯水、阴性质控品、阳性质控品的试剂瓶或试剂管设置在所述第三试剂架上。

本实用新型实施例提供的用于检测肝癌标记核酸分子的试剂盒，先利用提取RNA的试剂对阴性、阳性质控品及待测血清样本进行RNA抽提，得到阴性、阳性质控RNA样本及待测RNA样品，然后再将得到的待测RNA样品作为模板利用逆转录试剂进行逆转录，得到cDNA片段；得到的cDNA片段通过加入PCR扩增试剂(其中所含的引物分别根据肝癌标记核酸分子及内参U6SnRNA特异性合成)之后进行荧光定量PCR扩增，得到扩增片段并确定肝癌标记核酸分子和内参基因的Ct值，进而通过相对定量法快速准确的测得待测血清中肝癌标记核酸分子的相对表达量。

可选的，所述第一试剂架、所述第二试剂架以及所述第三试剂架上均设置有多个用于装载试剂瓶或试剂管的通孔。

可选的，所述第一试剂架、所述第二试剂架以及所述第三试剂架上与所述底壁之间设置有泡沫层。

可选的，所述用于提取RNA的试剂为Trizol试剂、磁珠法抽提RNA所用的试剂。

可选的，所述逆转录试剂包括：肝癌标记核酸分子的逆转录引物和逆转录酶；