[实用新型]一种快速定量检测IGFBP-7和TIMP-2的免疫荧光试纸条

说明书

技术领域

本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种快速定量检测IGFBP-7和TIMP-2的免疫荧光试纸条。

背景技术

急性肾衰竭（AKI）是一个由多种病因引起的临床综合征，是因肾循环衰竭或肾小管的变化而引起的一种突发性肾功能丧失，因此肾脏无法排除身体的代谢废物。当肾脏无法行使正常功能时，会导致毒素，废物和水分在体内堆积，而引起急性肾衰竭。

与急性肾衰竭（AKI）检测相关的标志物有许多种，如KIM-1、L-FABP都最引人注目的作为AKI诊断生物标志物。研究表明，在AKI中，岛素样生长因子结合蛋白（insulin-like growth factor-binding protein-7，胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP-7））和组织金属蛋白酶抑制剂-2（tissue inhibitor of metalloproteinases-2，金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2））是细胞周期阻滞是一个关键的机制，可用于检测AKI。而且IGFBP7和金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2） AUC（曲线下面积）分别为0.76 和0.79，两者联合胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP-7）和金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2） AUC为0.80。而其它标志物AUC≤0.72。因此两者联合比现有检测标志物可早12-36小时检测到AKI。

免疫荧光技术（Fluorescence Immunoassay technique） 是以荧光分子作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。生物素－亲合素系统（Biotin-Avidin—System，BAS）是一种非常有效的生物反应放大系统。生物素—亲合素系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。生物素—亲合素与标记试剂高亲合力的牢固结合及多级放大效应，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。它已成为目前广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术。BAS在实际应用中所具有的巨大优越性，主要表现在以下几个方面。

（1）生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比恬度高，具多价性。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。

（2）亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。

（3）亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，提高测定的精确度。（4）生物素和亲和素均可制成多种衍生物，不仅可与酶、荧光素和放射性核素等各类标记技术结合，用于检测体液、组织或细胞中的抗原-抗体、激素—受体和核酸系统以及其他多种生物学反应体系，而且也可制成亲和介质，用于分离提纯上述各反应体系中的反应物。

目前， IGFBP-7和TIMP-2的方法目前主要是酶联免疫技术（ELISA），ELISA技术存在以下缺点：检测设备要求高，成本高；干扰因素较多，重复性不好；检测时间长。因此酶联免疫技术检测IGFBP-7和TIMP-2不适合临床快速诊断。如何能够制作出快速的定量检测设备成为需要迫切解决的问题。

发明内容

本实用新型的一个目的是提供一种快速定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP-7）和金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2）的免疫荧光试纸条。