[实用新型]一种快速定量检测L-FABP的胶体金试纸

说明书

技术领域

本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种用于定量检测L-FABP的胶体金试纸。

背景技术

L-FABP(肝型脂肪酸结合蛋白)属于脂肪酸结合蛋白(FABP)家族的成员之一，是一组低分子量的可以结合长链脂肪酸的高保守性胞质蛋白。根据其组织特异性分布，已经分离出9种不同的FABP,分别为肝型(L-FABP)、小肠型(I-FABP)、心肌型(H-FABP)、脂肪细胞型(A-FABP)、表皮型(E-FABP)、回肠型(II-FABP)、脑型(B-FABP)、髓鞘型(M-FABP)、睾丸型(T-FABP)，主要在肝脏、小肠及肾脏表达。在肾脏中，L-FABP主要表达在近曲小管，在肾脏疾病出现大量蛋白尿、缺血和毒性等损害时，推测L-FABP参与尿夜游离脂肪酸的重吸收，促进β氧化供能，从而减轻氧应激损伤，从而保护肾脏。Yamamoto等人在研究肾脏缺血/再灌注与急性缺血性肾损伤的联系，用缺氧指示剂派莫硝唑显示组织缺氧损伤的范围，结果发现，在缺血/再灌注后2h时，在人L-FABP转基因小鼠和野生小鼠的肾组织中在肾脏外髓质和皮质部均出现派莫硝唑阳性区域，但转基因小鼠的损伤范围明显较小。进一步在缺氧状态下，通过检测转基因小鼠近端小管细胞和非转染细胞中ROS水平，发现转基因小鼠近端小管细胞ROS水平较非转染细胞显著下降，此研究结果提示高表达肾脏可能起到预防近端小管细胞发生缺血/再灌注损伤的作用。L-FABP分子质量较小，只有14.4KD，在肝细胞、肾小管细胞受到损伤时,细胞膜通透性变化可使其快速溢出，因此L-FABP可作为一个敏感、特异的组织损伤标志物，能很好的反应肾小管的损伤。

在肾脏中，L-FABP最引人注目的临床应用是作为AKI（急性肾损伤）诊断生物标志物。在一项研究尿L-FABP与AKI的关系中，对92例AKI患者与62例无AKI患者进行横断面研究，采用ROC曲线评价L-FABP诊断AKI的能力，ROC曲线下面积为0.93，是一个很好的AKI诊断分子标志物，并且研究指出，尿L-FABP含量越高，病人预后越差。

另外，近期的研究表明，尿L-FABP可以很好地预测AKI的发生。Portila等人的研究发现，在CBP手术后4h，尿L-FABP的含量在AKI患者中的含量显著高于非AKI患者的L-FABP含量。根据ROC曲线分析，AUC为0.810，可以作为手术后独立预测AKI风险的生物标志物；在一项临床研究中，在感染性休克ICU病人中，约30%左右的ICU病人，被检测出患有AKI，并且结果显示L-FABP作为标志物在判断感染性休克病人并发AKI时，ROC曲线上的AUC高达0.99，除此之外，研究结果还显示，病死患者中尿L-FABP的含量显著高于存活者的尿L-FABP的含量，尿L-FABP的含量与死亡率成显著性正相关，可以说明L-FABP在预测ICU患者的死亡率方面有着非常好的效果；而在一项造影剂与AKI关系的研究中证实，66患者中有13人在非急诊血管造影前就出现尿L-FABP显著升高；随后，13人都出现了造影剂引发的肾病，尿L-FABP可以作为预测和诊断患者使用造影剂而导致的造影剂急性肾损伤（CI-AKI）。

随着其它的研究逐步深入，尿L-FABP显示在检测局灶性肾小球坏死、糖尿病肾病、冠脉造影剂所致肾病、心脏转流术后急性肾损伤以及肾脏移植缺血再灌注造成的肾损伤方面，均显示了非常好的预测作用。所以，尿L-FABP可以作为非常好的诊断AKI以及预测AKI的生物标志物。

免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。