[实用新型]猪伪狂犬病毒gB和gE抗体的ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于兽用疫病检测技术领域，具体涉及一猪伪狂犬病毒gB和gE抗体的ELISA检测试剂盒。

背景技术

伪狂犬病（Pseudorabies）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。猪是伪狂犬病最主要的贮存宿主和传染源。健康猪与病猪、带毒猪直接接触可感染本病。成年猪常为隐性感染；受感染的怀孕母猪则出现流产、死胎、弱胎和木乃伊胎等病征；受感染的新生仔猪出现发热及神经症状，甚至衰竭死亡，死亡率可达100%。伪狂犬病对我国乃至全球养猪业的健康发展造成了巨大的经济损失，成为严重危害养猪业健康发展的重大传染病之一。

在PRV与宿主的相互作用中，结构蛋白gB非常保守，具有良好的免疫原性且抗原表位分析清晰，可作为理想的血清学检测用抗原。gE糖蛋白是PRV的一种十分重要的糖蛋白，在决定病毒的毒力及神经嗜性等方面起着重要作用，但gE不是PRV增殖所必需的蛋白，常作为缺失的候选基因。猪伪狂犬病毒gE抗体检测能有效地区分野毒感染，结合gB抗体的检测，能在区分野毒感染的同时监测疫苗抗体水平。

实用新型内容

本实用新型的目的是为了提供一种快速、有效、同时检测猪伪狂犬病毒gB和gE抗体的ELISA检测试剂盒。为实验动物筛选、PRV疫苗效果的评价和猪场PRV净化提供新的快捷高效的工具。

为了实现上述目的，本实用新型采用如下技术方案：

一种猪伪狂犬病毒gB和gE抗体的ELISA检测试剂盒，该试剂盒有一个盒体1，盒体1内设有抗原包被反应板存放槽2、猪伪狂犬病毒gB抗体阳性对照液孔槽3、猪伪狂犬病毒gE抗体阳性对照液孔槽4、猪伪狂犬病毒gB和gE抗体阴性对照液孔槽5、样品稀释液孔槽6、酶结合物孔槽7、浓缩洗涤液孔槽8、酶底物A溶液孔槽9、酶底物B溶液孔槽10、终止液孔槽11和操作说明书存放槽12；抗原包被反应板存放槽2内放置抗原包被反应板，各孔槽中（3-11）放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽12内放置操作说明书。所述的抗原包被反应板分为检测区Ⅰ和检测区Ⅱ，检测区Ⅰ和检测区Ⅱ分别包被猪伪狂犬病毒gB蛋白抗原和猪伪狂犬病毒gE蛋白抗原。

上述的猪伪狂犬病毒gB和gE蛋白抗原均为高纯度的原核表达蛋白，可按照本领域常规技术制备或购买市售产品均可。

所述的抗原包被反应板的规格优选为96孔，从上至下平均分为检测区Ⅰ和检测区Ⅱ，每个区域48孔。

所述的样品稀释液优选为在0.01mol/L、pH 7.2-7.4的磷酸盐缓冲液中加入BSA和 NaN₃，使BSA和 NaN₃的浓度分别为0.1-10%和0.01-0.05%；按20mL/瓶分装。

所述的猪伪狂犬病毒gB抗体阳性对照液和猪伪狂犬病毒gE抗体阳性对照液优选为将猪伪狂犬病毒gB和gE抗体的猪阳性血清分别用样品稀释液100倍稀释配制而成；分别按1mL/瓶分装。

所述的猪伪狂犬病毒gB和gE抗体阴性对照液优选为将不含有猪伪狂犬病毒gB和gE抗体的猪阴性血清用样品稀释液100倍稀释配制而成；按1mL/瓶分装。

所述的酶结合物优选为用样品稀释液将商品化小鼠抗猪IgG酶标二抗按1:2000稀释制成；按10mL/瓶分装。

所述的浓缩洗涤液优选为在0.1mol/L PBS溶液中加入吐温-20（Tween-20），使得吐温-20的浓度为0.5%（v/v），使用时用水10倍稀释；按30mL/瓶分装。

所述的酶底物A溶液优选为含有0.01-0.1%过氧化氢（H₂O₂）的1%乙酸钠溶液，pH5.0；按5mL/瓶分装。

所述的酶底物B溶液优选为溶有0.2-1g 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的10mL二甲基亚砜与溶有10g乙酸钠、pH5.0的1000mL水取990mL的混合溶液；按5mL/瓶分装。

所述的终止液优选为取54.3mL 95%浓硫酸，加蒸馏水至1000mL得到；按5mL/瓶分装。

本实用新型采用酶联免疫间接法，将猪伪狂犬病毒gB和gE蛋白抗原分别包被在抗原包被板的两个检测区内，可分别于待检样品中的特异性抗体反应，形成抗原抗体复合物，再加入小鼠抗猪IgG二抗的酶结合物，形成“抗原-抗体-二抗-酶”复合物，最后通过加入酶底物A液和B液进行显色，并读取光吸收值（OD_450nm）。