[实用新型]一种猪霍乱沙门氏菌酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测猪霍乱沙门氏菌的酶联免疫试剂盒。

背景技术

猪霍乱沙门氏菌（Shigella boydii）属于志贺氏菌C群，是一种重要的食源性致病菌，可通过受污染的肉、蛋、鱼及其制品等动物性产品，瓜子仁等进入人体，引起发热、腹痛、里急后重，有时表现为全身中毒症状为中毒性痢疾，治疗不彻底转为慢性。

目前猪霍乱沙门氏菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但国内外目前尚无可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以猪霍乱沙门氏菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及猪霍乱沙门氏菌快速检测产品。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种检测猪霍乱沙门氏菌的检测试剂盒。

具体而言，本实用新型提供了一种猪霍乱沙门氏菌酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有自封袋和衬垫，所述自封袋内设有包被了作为捕捉抗体的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体的酶标反应板，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有阳性对照溶液、阴性对照溶液、10×浓缩洗涤液、显色液、终止液、酶标抗体溶液和酶标抗体稀释液，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的作为检测抗体的抗猪霍乱沙门氏菌的单克隆抗体。

在一优选例中，所述酶标反应板由支撑架和设于支撑架上的可拆卸式微孔条构成，所述微孔条上设有微孔，所述微孔中包被有作为捕捉抗体的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的作为捕捉抗体的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系Mab05-F10，CGMCC No.7712产生，所述作为检测抗体的抗猪霍乱沙门氏菌的单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系Mab05-D10，CGMCC No.7710产生。

此外，在本实用新型的试剂盒中还可包含使用说明书，用于说明其中装载的试剂的使用方法。

本实用新型的酶联免疫试剂盒的检测原理及有益效果如下：

本实用新型的试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫法。当在酶标反应板微孔条上预包被抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体（捕捉抗体）时，加入样品溶液或标准品后，再加入辣根过氧化物酶标记的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体（检测抗体），样品或标准品中存在的猪霍乱沙门氏菌与酶标反应板上包被的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体相结合，加入检测抗体后，会形成“抗体—抗原—酶标抗体”复合物，经过TMB（四甲基联苯胺）显色后会形成黄色物质，从而判断样品中猪霍乱沙门氏菌的存在与否以及存在的量。

用酶标仪于450nm下测定吸光度值。阴性对照≤0.1、阳性对照≥0.3，实验结果有效，否则结果判定为无效；检测孔OD值≥0.2时，判定为阳性；检测孔OD值介于0.1-0.2之间时，判定为弱阳性；检测孔OD值≤0.1判定为阴性。

试验表明，本实用新型的猪霍乱沙门氏菌酶联免疫试剂盒，有较高的灵敏度和准确度。板间误差小于5%，板内CV小于3%。与单增李斯特、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、出血性大肠杆菌O157:H7、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽孢杆菌等均无交叉反应。

总之，本实用新型的试剂盒对样品的前处理要求低，操作简便，检测极限为105cfu/ml，特异性和稳定性好，并与大多数食源性致病菌都没有交叉反应。

本实用新型各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本实用新型的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1是本实用新型的检测试剂盒的结构示意图；

图2是本实用新型的检测试剂盒的酶标反应板的示意图。

附图标记释义：1.盒体；2.衬垫；3.容器孔；4.微孔板；5.支撑架；6.微孔条；7.微孔。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室指南（New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989）中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。