[实用新型]一种出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测出血性大肠杆菌O157:H7的酶联免疫试剂盒。

背景技术

出血性大肠杆菌O157:H7（Escherichia coli O157:H7）是肠道大肠杆菌的主要血清型，可通过牛肉及其制品、牛奶及其制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等传播。出血性大肠杆菌O157:H7可引起肠炎，受感染病人的典型临床症状为血便、腹痛、低热或不发热，约有10%的病人可发展成为溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫癜，并且可对被感染病人的肠道、肝、脾、肾、淋巴、脑、呼吸系统和神经系统造成损伤。老人和儿童为高危人群，易发生溶血性尿毒症，死亡率高达30%以上。世界卫生组织已经将出血性大肠杆菌O157:H7肠炎列为新发传染病。出血性大肠杆菌O157:H7感染已经成为一个世界性的卫生问题。

目前出血性大肠杆菌O157:H7的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。分子生物学和免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以出血性大肠杆菌O157:H7为检测靶标，所要求保护的技术涉及出血性大肠杆菌O157:H7快速检测产品。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种检测出血性大肠杆菌O157:H7的检测试剂盒。

具体而言，本实用新型提供了一种出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有自封袋和衬垫，所述自封袋内设有包被了作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的酶标反应板，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有阳性对照溶液、阴性对照溶液、10×浓缩洗涤液、显色液、终止液、酶标抗体溶液和酶标抗体稀释液，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的作为检测抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体。

在一优选例中，所述酶标反应板由支撑架和设于支撑架上的可拆卸式微孔条构成，所述微孔条上设有微孔，所述微孔中包被有作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系3A8F11B10E7产生，所述作为检测抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系GS2-D3产生。

此外，在本实用新型的试剂盒中还可包含使用说明书，用于说明其中装载的试剂的使用方法。

本实用新型的酶联免疫试剂盒的检测原理及有益效果如下：

本实用新型的试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫法。当在酶标反应板微孔条上预包被抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体（捕捉抗体）时，加入样品溶液或标准品后，再加入辣根过氧化物酶标记的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体（检测抗体），样品或标准品中存在的出血性大肠杆菌O157:H7与酶标反应板上包被的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体相结合，加入检测抗体后，会形成“抗体—抗原—酶标抗体”复合物，经过TMB（四甲基联苯胺）显色后会形成黄色物质，从而判断样品中出血性大肠杆菌O157:H7的存在与否以及存在的量。

用酶标仪于450nm下测定吸光度值。阴性对照≤0.1、阳性对照≥0.3，实验结果有效，否则结果判定为无效；检测孔OD值≥0.2时，判定为阳性；检测孔OD值介于0.1-0.2之间时，判定为弱阳性；检测孔OD值≤0.1判定为阴性。

试验表明，本实用新型的出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫试剂盒，有较高的灵敏度和准确度。板间误差小于10%，板内CV小于3%。与单增李斯特、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、副溶血弧菌、阪崎肠杆菌、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽孢杆菌等均无交叉反应。

总之，本实用新型的试剂盒对样品的前处理要求低，操作简便，检测极限为105cfu/ml，特异性和稳定性好，并与大多数食源性致病菌都没有交叉反应。

本实用新型各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本实用新型的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1是本实用新型的检测试剂盒的结构示意图；

图2是本实用新型的检测试剂盒的酶标反应板的示意图。

附图标记释义：1.盒体；2.衬垫；3.容器孔；4.微孔板；5.支撑架；6.微孔条；7.微孔。