[发明专利]温敏荧光化合物及其应用

权利要求书

1.一种式I所示化合物，

I

其特征在于，所述化合物为下式所示化合物：

II；

III；

X；或

XI。

2.式I所示化合物在测量活细胞内温度分布中的用途，所述用途是非诊断或治疗目的，

I

其中，

R₉选自：1-22个碳原子的烃基，2-3个碳原子的酯基取代的1-3个碳原子的烷基，或式IX所示取代基取代的甲基

IX

R₅、R₆、R₇、R₈独立选自1-3个碳原子的烃基，和

R₁、R₂、R₃、R₄均为H或1-3个碳原子的烃基。

3.下式所示化合物在测量活细胞内温度分布中的用途，所述用途是非诊断或治疗目的：

III；

IV；

V；

VI；

VII；或

VIII。

4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述活细胞内温度分布是亚细胞结构的温度分布。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述亚细胞结构是细胞膜、胞浆或线粒体。

6.式I所示化合物或式2所示化合物在利用温敏荧光化合物测量活细胞内温度分布时的温敏荧光化合物分布校准中的用途，所述用途是非诊断或治疗目的，

I；

其特征在于，所述化合物是以下化合物：

II；

X；

XI；或

2。

7.一种测量活细胞内温度分布的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

当利用温敏荧光化合物的反斯托克斯发光成像测量活细胞内温度分布时，

(1) 利用式I所示化合物对活细胞进行染色；

I

其中，

R₉选自：1-22个碳原子的烃基，2-3个碳原子的酯基取代的1-3个碳原子的烷基，或式IX所示取代基取代的甲基，

IX

R₅、R₆、R₇、R₈独立选自1-3个碳原子的烃基，和

R₁、R₂、R₃、R₄均为H或1-3个碳原子的烃基；

(2) 在荧光显微镜下对步骤(1)所述染色的细胞进行成像；

(3) 使用公式(1)对荧光图像进行计算：

相对荧光强度：， 公式(1)

其中是玻尔兹曼常数，是绝对温度，是活化能，A是拟合常数，相对荧光强度是式I所示化合物的反斯托克斯发光用该化合物自身的斯托克斯发光归一化之后的比值，

预先测定相对荧光强度随温度变化的标准曲线，利用公式（1）进行计算，从而得到活细胞内温度的分布图像，

所述活细胞内温度分布是指胞浆、高尔基体、细胞膜的温度分布；

或者

当利用温敏荧光化合物的斯托克斯发光或反斯托克斯发光成像测量活细胞内温度分布时，

(1) 利用式I所示化合物以及校准荧光化合物对活细胞进行同时染色；

I

其中，

R₉选自：1-22个碳原子的烃基，2-3个碳原子的酯基取代的1-3个碳原子的烷基，或式IX所示取代基取代的甲基，

IX

R₅、R₆、R₇、R₈独立选自1-3个碳原子的烃基，和

R₁、R₂、R₃、R₄均为H或1-3个碳原子的烃基；

(2) 在荧光显微镜下对步骤(1)所述染色的细胞进行成像；

(3) 根据温度变化与相对荧光强度的线性关系，利用预先测得的标准曲线进行计算，得到活细胞内温度的分布图像，这里的相对荧光强度是指温敏荧光化合物的斯托克斯或反斯托克斯发光强度用校准荧光化合物的斯托克斯发光强度作归一化处理所得到的比值；

所述校准荧光化合物是以下化合物：

II；

X；

XI；或

2

所述方法是非诊断或治疗目的。