[发明专利]一种古代泥化丝织品模拟样的检测方法

权利要求书

1.一种古代泥化丝织品模拟样的检测方法，其特征在于采取步骤如下：

1）缓冲溶液的配制：配制PBS 7.4缓冲液：称取KCl 0.2g，KH₂PO₄ 0.27g，NaCl 8.0g，Na₂HPO₄ 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4；配制PBS 9.6缓冲液：称取Na₂CO₃ 0.15g，NaHCO₃ 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6；

2）分别称取1g标准土样，按字母顺序标记为A-I共九组；按照分组依次加入1ml的丝素蛋白溶液；所述丝素蛋白溶液的浓度单位为g/ml，加入量分别是为10^-11、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3，所用溶剂为PBS 9.6缓冲液；将上述九组分别搅拌均匀，常温下放置1-3天；再按照分组依次加入99ml的丝素蛋白溶液，所述丝素蛋白溶液的浓度单位为g/ml，加入量分别是为10^-11、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3，所用溶剂为PBS 9.6缓冲液；将上述九组分别搅拌均匀，常温下静置2h；各组分别取上清液；

3）将步骤2）获得的九组上清液分别取80-120μl包被于酶标板上；同时单独将10^-3-10^-5g/ml、溶剂为PBS 9.6缓冲液的丝素蛋白溶液设立为阴性对照组并标记为N，也包被于酶标板上；将上述10组样在4℃下放置12h，然后用PBS 7.4溶液洗涤三次，每次三分钟；

4）向A-I组及阴性对照组N的酶标板孔内分别加入100-200μl的牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液的质量浓度为1%，溶剂为PBS 7.4缓冲液；之后用保鲜膜封板，在37℃下孵育2h，然后用PBS 7.4缓冲液洗涤三次，每次三分钟；

5）向A-I组的酶标板孔内分别加入100μl的3000-10000倍稀释的辣根过氧化酶标记的兔抗丝素蛋白抗体，所述稀释溶剂为质量浓度1%的牛血清白蛋白溶液，同时阴性对照组N的孔内加入100μl的PBS 7.4缓冲液代替抗体；将上述10组样品控制温度在37℃下孵育1h；然后用PBS7.4缓冲液洗涤三次，每次三分钟；

6）向经步骤5）处理后A-I组及阴性对照组N的酶标板孔内加底物液质量浓度为1%的四甲基联苯胺溶液80-120μl，置于黑暗处反应10min；再向各孔中加入1mol/l的H₂SO₄ 溶液80-120μl，终止反应；

7）将步骤6）处理后的酶标板放置于酶标仪中，读取波长λ=450nm处的吸光度数值；比较实验组A-I与阴性对照组N测得的吸光度OD的值：

若OD_A-I/OD_N＞2.1，则证明所检测的溶液呈现阳性，

若OD_A-I/OD_N≤2.1，则证明所测得的溶液呈现阴性；

通过阴阳性判断可以推测出丝素蛋白在标准土样中的检出限。