[发明专利]一种利用离子交换纤维固定化果糖基转移酶的制备方法

权利要求书

1.一种利用离子交换纤维固定化果糖基转移酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）高含果糖基转移酶菌丝体制备：经米曲霉（Aspergillus oryzae）大量发酵得到菌丝体，经分离洗涤得到干净菌丝体；

（2）游离果糖基转移酶液制备：将步骤（1）制得的干净菌丝体置于搅拌罐内，添加2～4倍（W/W）重量的纯化水和1.5～2%(W/W)的活力为10～15万U/g固定化纤维酶，反应5～8h,离心分离取液体得到游离果糖基转移酶；

（3）固定化载体处理：选用粒度均匀的离子交换纤维，用食品级乙醇处理40～60min,然后用纯化水洗涤2～4次后备用;

（4）固定化吸附: 将步骤（2）得到的游离果糖基转移酶添加至固定化反应罐内并同时加入定量的离子交换纤维，吸附2～3h，过滤取固体物得到固定化果糖基转移酶；

（5）冷藏稳定吸附提升固定化：将步骤（4）所得固定化果糖基转移酶置于2～5℃冷库内保存4～6h,纯化水冲洗3～4次，即得到高活性固定化果糖基转移酶。

2.根据权利要求1所述的离子交换纤维固定化果糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）米曲霉（Aspergillus oryzae）发酵产酶，温度=28～33℃，pH=4.5～6.5，时间=36～42h,通气量为0.15VVM。

3.根据权利要求1所述离子交换纤维固定化果糖基转移酶的制备方法，其特征在于所述步骤（2）搅拌罐搅拌转速为50～80r/min,离心机为上卸料式，离心半径=400mm,电机转速=1400～1500/min,操作温度=30℃。

4.根据权利要求1所述的离子交换纤维固定化果糖基转移酶制备方法，其特征在于，所用离子交换纤维是弱碱型，所述步骤（3）食品级乙醇浓度=55～70%（V/V）。

5.根据权利要求1所述离子交换纤维固定化果糖基转移酶的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）固定化温度=25～28℃，PH=5.5～6.5，搅拌转速=35～45r/min,每300～400U活力加入1～1.5g离子交换纤维载体，吸附时间=2～3h。

6.根据权利要求1所述的离子交换纤维固定化果糖基转移酶制备方法，其特征在于，所述步骤（5）固定化果糖基转移酶置于冷藏温度= 2～5℃，时间=4～6h,纯化水洗涤即得到高活性固定化果糖基转移酶。