[发明专利]一种表达菌丝霉素的重组菌及其应用

说明书

本发明公开了一种表达菌丝霉素的重组菌及其应用。该重组菌的分类命名为乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9700‑pGMN3，保藏编号为CCTCC NO:M 2014611，可以超高表达菌丝霉素蛋白的重组菌，其表达量远远超过其他阳性重组菌的表达量，并且还能够直接用于制备抑菌药剂的重组菌，其无安全隐患，几乎无副作用；本发明菌株具有抑制耐药性金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、化脓链球菌、粪肠球菌等的作用；本发明菌株能在自诱导下高效持续的表达，在发酵过程中表达并分泌含菌丝霉素的融合蛋白，白总产量在1.41g/L以上，其中菌丝霉素占70%以上，具有治疗乳腺炎和生殖道的感染性疾病的潜能。

技术领域

本发明涉及一株新菌种及其在治疗炎症方面的应用，具体涉及一株表达菌丝霉素的重组菌及其应用。

背景技术

乳酸菌（lactis acid bacteria，LAB）是一类能大量发酵碳水化合物并产生乳酸的革兰氏阳性细菌，其包括乳酸球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌等10几个属，在食品工业各个领域中的长期应用已证明其无致病性。乳酸菌是人和大多数动物肠道内常见细菌，广泛分布于消化系统、呼吸系统、分泌系统、口腔系统和粪便中。

防御素（defensin）是广泛存在于生物体中的一种宿主防御肽，构成机体抵御病原微生物的第一道防线。一般为2-6kDa，富含正电荷氨基酸残基，含6-8个半胱氨酸（Cys），从而形成3-4对二硫键。1985年首次从人嗜中性白细胞中分离得到3个小肽，而后将它们与从兔、豚鼠中分离的同类小肽一起命名为防御素。防御素具有抗菌、抗病毒、趋化、免疫调节等多种生物学功能，其中广谱抗菌功能最重要。防御素为第一大类抗菌肽，迄今共发现了600种左右，约占已报道抗菌肽总量的1/3。主要来源于哺乳动物、植物、昆虫等。

菌丝霉素（Plectasin）是2005年首次由Hans-Henrik Kristensen 课题组从叫做腐生子囊菌假黑盘菌（Pseudoplectania nigrella）的一种真菌中分离得到，这种菌生长于北欧松树林中。Plectasin是首个从真菌中发现的防御素。菌丝霉素完整的开放阅读框编码一个长为95个氨基酸的多肽链，共由3部分组成。信号肽序列（1-23位氨基酸）、前肽（24-55位氨基酸）和C-末端成熟肽（56-95位氨基酸）。成熟的Plectasin由40个氨基酸残基组成，即56-95位氨基酸。包含有6个半胱氨酸Cys残基和5个赖氨酸Lys残基，另外还有一个独特的阴离子四肽模体。其净电荷数为+1～+3。Plectasin与细菌细胞壁形成的前体物质Lipid Ⅱ具有很强的亲和性，可以通过与Lipid Ⅱ结合阻止病菌细胞壁的形成，从而阻止病菌繁殖。Plectasin独特的作用机制不易诱导产生耐药性菌株。

随着抗生素在临床上的广泛使用，细菌耐药性问题日趋严重，增加了疾病治愈的难度并且给患者和社会带来了严重的经济负担。特别是近年来“超级细菌”逐渐增多，使得在合理用药的同时研发新一代安全高效的抗菌制剂显得尤为迫切。

发明内容

本发明的目的在于提供一种表达菌丝霉素的重组菌及其应用。

本发明所采取的技术方案是：