[发明专利]一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于制药工程技术领域，具体地说，涉及一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法。

背景技术

磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine简称PE)又称乙醇胺磷酸甘油酯，结构上是由乙醇胺和磷脂酸两部分组成的一类磷脂化合物。较早时应用于食品加工及保健品研究等领域，随着研究的不断深入，磷脂酰乙醇胺逐渐的被人们应用到药物制剂领域，在如今最活跃的脂质体技术领域，不仅高纯度磷脂酰乙醇胺是脂质体制剂的重要辅料来源，也是其他重要的脂质体辅料如合成磷脂(DOPE、DEPE等)的关键起始原料。目前中国药典收载的药用磷脂主要控制指标包括甘油三酯、游离脂肪酸、过氧化值、酸值等，另外甲氧基苯胺值是过氧化物的再次氧化产物指标，在制剂中有严格控制，因此开发注射用磷脂酰乙醇胺需要严格控制上述关键指标。

目前分离磷脂酰乙醇胺的方法有CO₂超临界萃取法、溶剂萃取法、吸附法、柱层析法等。

CO₂超临界萃取法只适合制备混合磷脂，所得产品磷脂酰乙醇胺含量普遍偏低。磷脂酰乙醇胺与其他磷脂的分子量较接近，膜分离法要得到单一磷脂酰乙醇胺仍存在困难，其产品含量偏低不能满足药用磷脂要求。溶剂提取法是通过磷脂酰乙醇胺在两相溶剂中的溶解度的差异达到富集纯化的目的，对理化性质非常相似的各类磷脂杂质的选择性较差。

吸附法是一种较常用的纯化方法，通过选择不同理化特性的吸附剂对待吸附原料液进行搅拌吸附，达到纯化的效果，常见的吸附剂有：三氧化二铝、硅胶等，该方法只对磷脂酰胆碱、酸值等指标有一定的吸附效果，很难保证含量、溶血磷脂酰胆碱(LPC)等关键指标符合药用标准。

硅胶柱层析法是另一种较常用的分离纯化方法，固定相与待分离物质的比例、洗脱溶剂种类和比例对柱层析的分离效果与除杂能力有巨大的影响，柱层析方法的溶剂及比例选择与产品本身的性质以及杂质性质有关，该方法虽常见，但能够使产品纯度高同时又能符合注射用要求的方法未见报道。

采用柱层析纯化磷脂酰乙醇胺的专利较多，如中国专利CN100336818C、CN103183705A分别公开了不同来源的磷脂酰乙醇胺粗品经柱层析硅胶过柱，利用卤代烷烃-甲醇洗脱得到磷脂酰乙醇胺含量分别为96.2％、91.4％～94.5％的产品，这两篇专利均采用卤代烷烃-甲醇两相体系为洗脱液，所得产品含量偏低，其他指标如甘油三酯、脂肪酸、过氧化值、甲氧基苯胺值等指标无法得到有效控制，难以满足药用辅料要求。

中国专利CN103102366A公开了一种于醇溶性磷脂中分离磷脂酰乙醇胺的方法，该方法以硅胶为填充剂，乙醇为洗脱剂，得到磷脂酰乙醇胺含量为86％～96.2％的产品。此方法采用单组分溶剂进行分离洗脱，受极性影响，很难控制产品中甘油三酯、脂肪酸、过氧化值、甲氧基苯胺值等指标，且该方法很难实现产业化生产。

以上三篇专利技术无论是用低碳醇洗脱，还是用卤代烷烃-甲醇洗脱，所得到磷脂酰乙醇胺产品仍然存在缺陷，含量、杂质限度与氧化指标等不能同时满足注射药用磷脂的要求。

在现有专利技术纯化磷脂酰乙醇胺的应用中，其产品杂质(磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆)、氧化指标(酸值、过氧化值、甲氧基苯胺值)不能完全符合药用磷脂的要求。目前开发药用磷脂的技术领域里，没有专门针对控制过氧化值、甲氧基苯胺值等理化指标的方法，磷脂酰乙醇胺具有高不稳定性，开发该类产品需要过度依赖于起始原料的新鲜度。受技术约束，目前国内药用磷脂酰乙醇胺主要依赖进口，且价格昂贵，供货周期长，导致磷脂酰乙醇胺相关产品开发周期长、成本高，不利于市场的普及应用。

因此，开发以脑磷脂粗品为原料，通过柱层析并对三元混合溶剂比例进行控制，经过两次洗脱，即可以提高产品含量又可以降低甘油三酯、游离脂肪酸、酸值、过氧化值、甲氧基苯胺值等关键指标，使得产品质量符合药用要求，对新型靶向制剂的发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高含量磷脂酰乙醇胺的制备方法。本发明通过柱层析以三元混合溶剂为洗脱剂进行两次洗脱，一步提高磷脂酰乙醇胺含量并且有效控制产品中杂质限度(磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、游离脂肪酸、甘油三酯)和氧化指标(酸值、过氧化值、甲氧基苯胺值)。

方法的步骤如下：

以脑磷脂粗品为原料，加入多卤代烷烃溶解，经过柱层析以多卤代烷烃-低碳醇-水所组成的三元混合溶剂进行两次洗脱处理，干燥，得到高纯度磷脂酰乙醇胺产品。

方法所用脑磷脂粗品原料为来源于大豆、蛋黄的磷脂粗品，其中磷脂酰乙醇胺含量大于50％。