[发明专利]一种具有治疗痤疮作用的活性多肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，特别涉及一种具有治疗痤疮作用的活性多肽及其制备方法和应用。

背景技术

痤疮是一种常见的损容性皮肤病，目前尚无满意的疗法，其严重影响患者的生活质量。目前认为主要与下列4种因素有关：皮脂分泌过多，毛囊口的角化过度，痤疮丙酸杆菌的定植与侵袭，炎症反应。其中炎症反应是贯穿痤疮发病的重要原因，而痤疮丙酸杆菌是炎症反应的首要因素。痤疮丙酸杆菌能分泌许多前炎症介质，诱导局部炎症反应和机体对其的免疫反应。Toll样受体(Toll-like receptor TLR)是天然免疫系统中的主要模式识别受体，在宿主对微生物感染的防御中起重要作用。最近研究证实：痤疮丙酸杆菌通过TLR(Toll-like-receptors，TLRs)依赖途经激活单核细胞，从而释放细胞因子引起炎症。一系列实验证明，痤疮丙酸杆菌诱导机体的免疫应答主要是通过TLR2来介导的。痤疮皮损内可见TLR2表达，特别在毛囊及毛囊周围，且TLR2阳性细胞的数量随着皮损持续时间的延长而增加。将TLR2转染至缺陷细胞(HEK 293细胞)后，用痤疮丙酸杆菌刺激，在TLR2转染的细胞可出现核因子-κβ的活化及核内迁移。用不同浓度超声破碎的痤疮丙酸杆菌来刺激原代培养的正常人单核细胞，可见有IL-12及IL-8呈剂量依赖式产生，此现象可被抗-TLR2中和抗体所阻断。我们以前的研究显示TLR2主要在外周血单核细胞上表达，跟正常人对照组相比，痤疮患者外周血单核细胞的表达明显上调。

IL-8和TNF-α是两种重要的促炎细胞因子，它们可使炎细胞激活，炎细胞激活后产生一系列炎症反应介质，后者可使炎细胞进一步激活从而引起炎症级联反应或瀑布反应。痤疮是一种慢性炎症，当痤疮发生时，皮肤的免疫系统开始发挥作用，细胞因子开始大量出现，近年来通过很多实验证实，细胞因子在介导这种慢性炎症的过程中起着很重要的作用，很多促炎性细胞因子参与了痤疮的发病过程。IL-8主要由单核-巨噬细胞产生，属于趋化性细胞因子α亚家族的代表，是一种具有内源性白细胞活化性的碱基一肝素结合性蛋白质。它可以吸引中性粒细胞、巨噬细胞等炎性细胞迁移至炎症灶，使之激活，并促进它们的生物学功能，增加炎症反应。IL-8是前炎细胞因子，也是启动抗菌炎症反应的关键因子。TNF-α具有广泛的生物学活性，是机体炎症和免疫反应的重要调节因子，可由单核-巨噬细胞产生，并介导天然免疫，同样也是前炎细胞因子，是启动固有性免疫应答的关键。我们的研究发现在痤疮的发病过程中，这些细胞因子水平升高，对痤疮的发生起到重要的促进作用。

发明内容

基于此，本发明提供一种具有治疗痤疮作用的活性多肽的制备方法。

解决上述技术问题的具体技术方案如下：

一种具有治疗痤疮作用的生物活性多肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)取经脱脂处理的毛发，加4～6倍量的浓度为0.4～2.0mol/L的巯基试剂进行反应，用超纯水洗去巯基试剂，50～80℃干燥，得产物A；所述反应的温度为10～40℃，时间为1～6h；

(2)在产物A中加4～6倍量的浓度为0.2～1mol/L的酸进行反应，后用超纯水漂洗除去反应产物中剩余的酸，干燥，得产物B；所述反应的温度为10～40℃，时间为4～8h；

(3)在产物B中加4～6倍量的浓度为0.5-2.0mol/L的碱进行反应，调节pH为7.0-7.5，调控渗透压为300±20mOsm/L，得产物C，即蛋白质和肽类物质；所述反应的温度为10～40℃，时间为20-40h；

(4)将产物C于转速为1000～8000转/min，离心5～20min，将沉淀干燥即可，即得固相剂型生物活性多肽。

优选的，步骤(1)所述反应的温度为20～30℃，时间为2.5～4.5h

优选的，步骤(2)所述反应的温度为20～30℃，时间为5～7h。

优选的，步骤(3)所述碱的浓度为1-1.5mol/L。

优选的，步骤(3)所述反应的温度为20-30℃，时间为25-35h。

优选的，步骤(4)所述离心的转速为5000-8000转/min。

优选的，步骤(1)所述巯基试剂的浓度为0.8-1.2mol/L。

优选的，步骤(1)-(2)所述的干燥的温度为50℃-80℃。

优选的，步骤(4)所述干燥为冷冻干燥或高温干燥。

优选的，步骤(2)所述的酸为HCI。

优选的，步骤(3)所述的碱为NaOH。